C A S A A L T I E M P O

PRACTICA DE LABORATORIO 2

DETERMINACIÓN DE PROTEINAS

INTRODUCCIÓN

El termino proteína fue utilizado por primera vez por el químico alemán Gerardus Mulder, en 1838 , tomo este nombre del vocablo griego PROTERIOS , que significa primordial nivel primario .

Las proteínas son un grupo de biopolímeros constituidos de aminoácidos que exhiben una amplia gama de estructuras y funciones .

Las proteínas como un grupo de biomoleculas , desempeñan una gran variedad de funciones , algunas participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan moléculas pequeñas.

Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica ) son proteínas al igual que las enzimas (catalizadores biológicos) y algunas hormonas.

Las proteínas pueden llevar a cavo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de combinaciones en la composición y secuencia de aminoácidos.

Las proteínas también se clasifican según su composición , las que se forman solo de residuos de aminoácidos y no tienen otras biomoleculas son PROTEÍNAS SIMPLES; no odas las proteínas son solubles en agua , de hecho las proteínas insolubles son esenciales para dar soporte y mantener la integridad estructural de las células y organismos.

DESARROLLO

METODO DE BIURET

Material por equipo

• 1 proveta de 50ml.

• 2 gradillas

• 2 pipetas de 10ml

• 3 pipetas de 5ml

• 1 pipeta de1ml

• tuvos de15x100-12 piezas

• 1 vaso de presipitados de 100 ml

• 12 tubos de 16x150

• 1 balanza granataria

• papel parafilm para 10 tubos

• papel embudo y un filtro

REACTIVOS POR EQUIPO

• Agua destilada

• Solucion de acido acetico 0.1 N

• Solucion de Acetato de sodio 0.1 N

• Solucion de caseina (contenido 4 mg/ml)

• Reactivo de Biyret 50ml

MATERIAL TRAIDO POR EQUIPO:

• 6 gramos aprox. De leche en polvo descremada

• 1 plumon indeleble

• masking tape

• javon y franela para limpiar

DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELECTRICO

En la preparación de tubos con solucion amortiguadora de acetatos en la grailla se colocaron 6 tubos de 15x100 rotulados con numeros consecutivos , se adiciono a caadad tubo las soluciones de acido acetico y acetato de sodio con el siguiente orden :

TUBO SOLUCION DE ACIDO SOLUCION ACETATO DE

ACETICO 10.1 N SODIO 0.1N

1 5ml -

2 4 ml 1 ml

3 3ml 2ml

4 2ml 3ml

5 1ml 4ml

6 - 5ml

el volumen de cada tubo deberá de ser de 5 ml 1:30

PREPARACIÓN DE LA LECHE

En un vaso de precipitados de 100 ml se disolvieron 6 gr de leche en polvo descremada con 50 ml de agua destilada incorporándola poco a poco para que no se formaran grumos .

En un tuvo de ensaye de 16x150 mm se midio 2ml de leche reidratada y añadimos 8ml de agua destilada agitando cuidadosamente por inversión. 1:5

PUNTO ISOELECTRICO

Añadimos 1 ml de leche diluida (1:5) a cada tubo de la solución amortiguadora , después mezclamos cuidadosamente todos los tubos y dejamos reposar por 10 minutos .

En el tubo 1 donde observamos los grumos de leche suspendidos en la solución se solubilizaron las proteínas de leche

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

Después se separo el sobrante y se transfirió a los tubos limpios de 15x100 rotulados con el numero de tubo que le correspondia.

• Tubo 1: CLARO

• Tubo 2 : CLARO CON SOBRENADANTE

• Tubo 3: CLARO CON SOBRENADANTE

• Tubo 4: CLARO CON SOBRENADANTE

• Tubo 5: TURBIO

• Tubo 6: TURBIO

DETERMINACIÓN DE PROTEINAS CON EL METODO DE BIURET

Se colocaron en una gradilla 11 tubos de 16x150 mm, rotulando a un tubo con el numero cero el cual llevo los reactivos para calibrar el espectrofotometro , los siguientes 4 tubos los rotulamos de I al IV , y los restante los rotulamos de 1 al 6.

Se añadio a cada tubo de reactivos para determinar las proteinas en la curva de calibración (I IV) y los sobrenadantes en los tubos del 1 al 6 .

Mezclamos cuidadosamente cadad reactivo y los dejamos en reposo por 30minutos para favorecer el color .

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

AZUL AZUL Y MORADO AZUL AZUL AZUL AZUL

TUBO I TUBO II TUBO III TUBO IV TUBO V TUBO VI

AZUL CLARO INTERMEDIO MORADO MORADO MORADO MORADO

RESULTADOS

En la siguente tabla estan los resultados que obtuvimos de absorvancia o densidad optica.

TUBO	I	II	III	IV	V	1	2	3	4	5	6
D.O	0.32	0.60	0.093	0.127	0.152	0.17	0.020	0.008	0.008	0.19	0.23
MG. DE PROTEINA	0.8	1.6	2.4	3.2	4	0	0.12	0.037	0.076	0.12

• Calcula el contenido proteico de los tubos I al IV deacuerdo al volumen empleado de la solucion en estandar de caseina y colocalos en el eje x.

• Coloca los valores O.D obtenidos para cada uno de estos tubos en el eje y y traza la curva correspondiente.

• Interpola los valores de O.D de los tubos 1-6 , calcula la cantdad de proteina precente en cada sobre nadante

TABLA DE RESULTADOS.

PROTEINA	Mg/ ml	Mg/ 100 ml
Sobrenadante1	5.1	510
Sobrenadante2	0.6	60
Sobrenadante3	0.24	24
Sobrenadante4	0.24	24
Sobrenadante5	0.57	57
Sobrenadante6	6.9	690

• haciendo uso de la ecuación de HEENDERSON HASELBACH calcula el pH del tubo de donde observaste la mayor precipitación de caseína.

0.4 mg proteina x 5x6x2 =24 mg proteina/ml

6g 1000 ml =120 g leche

30 ml 1 L L

2 ml + 8 ag

1 ml +5 = 6 ml 0.5+0.5 = 1 ml

24 g proteina

L = 0.2 g proteina

120 g leche g de leche

L

• Describa brevemente la ley de lambert y beer y cuales son sus limitaciones.

BIBLIOGRAFÍA

• Conceptos de bioquímica de Rodney Boyer

CONCLUSIÓN

Con el metodo de Biuret se le quitaron a la leche muchas de sus propiedades y al meter os resultados al centrifugado la leche salio muy clarita cambiando su aspecto natural , cumpliéndose el objetivo pudimos sacar el punto isoelectrico exacto