MICROBIOLOGIA DEL SUELO

En esta práctica vamos a analizar una muestra de suelo y para ellos vamos a medir diferentes parámetros. Para esto vamos a ver si hay presencia de:

A. Microorganismos solubilizadores de fosfatos.

B. Microorganismos degradadores de almidón.

C. Microorganismos productores de antibióticos.

D. Microorganismos amonificantes.

Para poder obtener un número de colonias entre 30 y 300 tendremos que hacer un banco de diluciones. Para esto partimos de una muestra sólida de suelo de 1g.

- Pasamos la muestra a un bote que contiene 100 ml de solución salina. Agitamos.

- Dejamos sedimentar.

- Hacemos diluciones decimales seriadas: tomamos 1 ml del bote con la muestra y los 100 ml y lo echamos en un tubo que contiene 9 ml de solución salina. Así, obtenemos una dilución de 10-1. Tomamos a continuación 1 ml de la dilución 10-1 y lo echamos en un 2º tubo que contiene 9 ml de solución salina. Por tanto, obtenemos una dilución 10-2. Hacemos lo mismo hasta obtener una batería de diluciones que van desde 10-1 a 10-4.

- De cada una de las diluciones haremos diferentes siembras según los -microorganismos que queramos medir

A. MICROORGANISMOS SOLUBILIZADORES DE FOSFATOS

I. OBJETIVO

El objetivo de la práctica es demostrar que si sobre un medio de cultivo base adicionamos fosfatos insolubles, sobre la placa aparecerá una suspensión opaca. Al incubar en dicha placa microorganismos solubilizadores de fosfatos se producirán zonas de aclaramiento alrededor de dicha colonia.

II. MATERIAL

- placas con medio de cultivo Ramos-Callao (1967) adicionado de fosfatos insolubles.

- 6 placas de Petri.

- espátula de Digralsky.

" Medio de cultivo Ramos-Callao

- Agar 20.0 g.

- Extracto de levadura 2.0 g.

- Glucosa 20.0 g.

- Agua destilada 1000 ml

Se disuelven los componentes en agua destilada. Se funde el medio 5 min. a 120°C. Ajustamos el pH a 7.2 y repartimos en tubos de ensayo con 9 ml de medio. Posteriormente esterilizamos. Antes de la solidificación añadimos asépticamente 1 ml de la suspensión de fosfatos insolubles.

" Suspensión de fosfatos

Como fosfato insolubles puede utilizarse fitato cálcico (orgánico), o bien fosfato bio o tricálcico (inorgánico). La suspensión de estos fosfatos, para investigar por separado, 2% P/V en una solución acuosa de goma arábiga al 5% (colode protector de la suspensión).

III. MÉTODO

1. Se preparan distintas diluciones de la solución bacteriana: 10-1, 10-2 y 10-3.

2. De cada una de estas se siembra una alícuota (0.1 ml) en la superficie de las placas de agar-fosfato previamente preparadas. Se sembrarán dos placas por cada una de las diluciones.

3. Se extiende con la espátula de Digrasky.

4. Incubamos a 28°C de 2-5 días.

IV. RESULTADOS