Aislamiento de gérmenes de una muestra natural, recuento de Ufc y obtención de cultivo puro.

El objetivo de la practica es el aislamiento de microorganismos de una muestra natural, como es el pimentón, para el posterior recuento de las unidades formadoras de colonias (Ufc) en cultivo procedente de la siembra en masa de la muestra. También sembramos por agotamiento en otra placa para poder hacer el cultivo puro tras el crecimiento de las colonias.

El material y métodos: la muestra natural: 0,5g de pimentón la vamos a diluir en un tubo con 9ml de agua destilada, esta será nuestra muestra original. A partir de esta vamos hacer 4 diluciones en otros 4 tubos con 9ml de agua cada uno. La 10-1 poniendo 1ml de la muestra en el primer tubo, con 1ml de esta muestra en el siguiente tubo, tenemos la dilución 10-2 y así, igual en los otros dos tubos, consiguiendo las diluciones 10-3 y 10-4.

Para hacer el cultivo de siembra en superficie, cogemos la muestra original e introducimos el asa de siembra previamente esterilizada para hacer la siembra por agotamiento, como siempre, volvemos a esterilizar el asa.

Con cada una de las diluciones hacemos una siembra en masa para lo cual cogemos 1ml de cada muestra con la pipeta, y lo ponemos en la placa de Petri. Esto se mezcla bien con el agar liquido y se deja solidificar.

Se ponen a incubar los cultivos durante 48horas a 28-30º y siempre las placas en posición invertida para que el agua de condensación caiga sobre la tapa y no sobre el cultivo, lo que podría mezclar las colonias.

Para obtener el cultivo puro, tocamos con el asa previamente esterilizada una colonia (nos aparecen multitud de colonias con diferente forma, tamaño, color) q este perfectamente aislada y sembramos en un tubo de agar inclinado. La obtención del cultivo puro sirve para poder identificar posteriormente, mediante tinción de Gram y pruebas bioquímicas, de qué microorganismo se trata. En el pimentón fundamentalmente hay bacilos Gram positivos esporulados, del genero Bacillus.

Para el recuento de las Ufc elegimos la placa que tenga entre 30 y 300 colonias. En nuestro caso, los resultados son: en el cultivo procedente de la dilución 10-3 aparecen 240Ufc mientras que en el procedente de la dilución 10-4 aparecen 47Ufc, elegimos esta última porque es preferible contar la menor cantidad siempre que esté dentro del rango 30-300.

En los cultivos procedentes de las otras dos diluciones aparecen muchísimas colonias.

Este dato lo tenemos que multiplicar por el factor de dilución 104, por 9 porque son los ml que teníamos y por 2 para calcular la cantidad de Ufc en 1g, ya que solo pusimos 0.5g de muestra.

• 47 x 9 x 2 = 8.460.000 Ufc/g de pimentón.

Este dato esta dentro de lo esperado para la muestra que teníamos.