Preparación de medios de cultivo

Microbiología. Microorganismos. Caldo de cultivo

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IES “A XUNQUEIRA I”

C.M. LAB

Px/MICRO/003

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

HOJA 1 DE 4 ED 0

09/12/02

1) OBJETO

El objeto del presente documento es la preparación de medios de cultivo.

2) ALCANCE

Este procedimiento se podrá aplicar para la preparación de medios de cultivo sólidos en placa Petri y en tubos de ensayo y dentro del tubo puede ser de tubo recto o tubo inclinado partiendo de preparados comerciales liofilizados.

3) REFERENCIAS

  • F. Calvo y V. PUIG “ MICROBIOLOGÍA” ed. ECIR VALENCIA.

  • EMILIO LEÂODE MATTOS SOVRIS “CURSO PRACTICO DE MICROBIOLOGÍA” Ed. MC GRAW-HILL.

4) GENERAL

  • Requerimientos nutricionales de los microorganismos.

  • Los microorganismos necesitan nutrientes para crecer, esas sustancias las adquieren del ambiente. Esos nutrientes son: C, H, O, N, S, P.

  • medios de cultivo.

  • Los medios de cultivo se pueden clasificar según: su estado físico y según la composición.

  • Según su estado físico:

  • SÓLIDOS: son los que llevan nutrientes disueltos en agua y agar que es el que produce la rigidez del medio.

    SEMISÓLIDOS: son semejantes a los sólidos pero con una concentración de agar menor para darle una consistencia gelatinosa.

    LÍQUIDOS O CALDOS: son los que solo contienen nutrientes disueltos en agua.

  • Según la composición:

  • GENERALES: son los medios de cultivo que permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos.

    ENRIQUECIDOS: son los medios de cultivo que se utilizan para aislar un tipo particular de microorganismos a partir de una población mixta.

    SELECTIVOS: son los medios de cultivo que favorece el crecimiento de ciertos microorganismos y suprimen el desarrollo de los demás.

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    HOJA 2 DE 4 ED 0

    09/12/02

    DIFERENCIALES: son los medios de cultivos que se utilizan para identificar colonias de un determinado microorganismos.

    SELECTIVO- DIFERENCIALES

    5) MATERIAL Y PRODUCTOS

    MATERIAL

    PRODUCTOS

    FRASCO PIREX

    1

    AGUA DESTILADA

    PLACA CALEFACTORA CON AGITACIÓN MAGNÉTICA

    1

    PCA, TSA

    AUTOCLAVE

    1

    PLACAS PETRI

    3

    MECHERO BUNSEN

    1

    6) PROCEDIMIENTO

    6.1 MÉTODO OPERATORIO

    Se pesa una cantidad de medio según las especificaciones del fabricante.

    Se vierte el medio sobre un frasco Pyrex y se completa con agua destilada hasta tener el volumen deseado.

    Se pone a ebullición sobre un agitador magnético con calefacción.

    Se pasa al autoclave y se esteriliza a 121ºC durante 20 min.

    Se deja enfriar hasta unos 50ºC ya que a menor temperatura se volverá sólido.

    se rellenan las placas Petri.

    Las placas se dejan gelificar tapadas sobre la mesa o en la cabina de flujo laminar.

    Se elimina el vaho.

    Se siembran las placas o se guardan en la nevera para cuando sea necesario utilizarlas.

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    6.2 DIAGRAMA DE FLUJO

    INCUBAR FRIGORÍFICO

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    HOJA 4 DE 4 ED 0

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    7) CÁLCULOS E INCERTIDUMBRES

    Al no contemplar cálculos en la realización practica de este procedimiento no procede a l estimación de incertidumbres.

    8) INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

    Se observa la perfecta solidificación de las placas y/o tubos con respeto a la formación de grumos, burbujas o fisuras en el gel.

    9) ANEXOS

    9.1 Para secar el vaho de condensación sobre la tapa de las placas Petri se colocan dentro de la estufa de forma invertida y con la tapa apoyada en la base.

    9.2 Preparación de medios de cultivos líquidos o caldos.

    Método operatorio:

  • Pesar la cantidad de caldo deshidratado necesaria.

  • Disolverlo en la cantidad adecuada de agua destilada.

  • Repartir X ml de caldo en tubos de ensayos limpios.

  • Si los tubos van a llevar una campana Durham para detectar la eliminación de gas se introduce en cada tubo una campana con la boca hacia abajo.

  • Tapar los tubos.

  • Esterilizar en el autoclave a121ºC durante 20 min.

  • Enfriar a temperatura ambiente.

  • PESAR EL MDC

    ENRASAR CON AGUA ESTILADA

    ESTERILIZAR 121ºC,1atm,20min

    ENFRIAR A 50ºC aprox. :

    RELLENAR PLACAS

    SIEMBRA

    NO SEMBRAR