Hibridación in situ de ADN (Ácido Desoxirribonucleico)

Anatomía Patológica y Citología. Hematoxilina. Coloraciones. Inmunohistoquímica

  • Enviado por: Mamen Y Otras
  • Idioma: castellano
  • País: España España
  • 50 páginas
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Técnicas de

Histología

Inmunohistoquímica

Hibridación

“In Situ”

Hospital Militar “Gómez Ulla”

ÍNDICE

TÉCNICAS DE HISTOLOGÍA

Técnicas según los tejidos ............................................................................... pág. 1

Hematoxilinas

Hematoxilina férrica de Weigert ......................................................... pág. 3

Hematoxilina iodada ............................................................................ “ 3

Hematoxilina de Mayer ....................................................................... “ 3

Coloraciones para tejido conjuntivo

Tricrómico de Masson ......................................................................... pág. 4

PTAH de Mallory ................................................................................ “ 5

Van Gieson .......................................................................................... “ 6

Orceína ................................................................................................. “ 7

Gallego ................................................................................................. “ 8

Plata Metenamina. Para riñón .............................................................. “ 9

Reticulina ............................................................................................. “ 10

Wilder .................................................................................................. “ 10

Coloraciones para hidratos de carbono

PAS-diastasa ........................................................................................ pág. 12

QSM .................................................................................................... “ 12

Carmín de Best ..................................................................................... “ 14

Mucicarmín .......................................................................................... “ 15

Mucicarmín (Variante) ............................................................. “ 16

Técnicas para el amiloide

Rojo Congo ............................................................................... “ 16

Violeta de Cristal ...................................................................... “ 17

Tioflavina T .............................................................................. “ 17

Coloraciones para el sistema nervioso

Nissl ..................................................................................................... pág. 19

Kluber Barrera del Azul-Xilol ............................................................. “ 19

Coloraciones para pigmentos

Hierro ................................................................................................... pág. 21

Pigmento biliar ..................................................................................... “ 21

Fontana. Para la melanina ..................................................................... “ 22

Coloraciones para lípidos

Oil Red O ............................................................................................. pág. 23

Sudán Negro ......................................................................................... “ 23

Coloraciones para los microorganismos

Gram ..................................................................................................... pág. 25

Ziehl Neelsen ........................................................................................ “ 25

Método de la plata metenamina. Modificación de Grocott .................. “ 26

Coloraciones para ADN y ARN

Verde metilo-pironina ........................................................................... pág. 28

Coloraciones para grupos fosfatos y carbonatos

Von Kossa ............................................................................................. pág. 29

INMUNOHISTOQUÍMICA

¿Qué marcan estos anticuerpos? ....................................................................... pág. 30

Clasificación según especificidad del anticuerpo .............................................. “ 41

HIBRIDACIÓN IN SITU DE ADN

CON SONDAS MARCADAS DE FLUORESCENCIA

Preparación de reactivos ................................................................................... pág. 44

Protocolo ........................................................................................................... “ 45

TÉCNICAS DE HISTOLOGÍA

1. TÉCNICAS SEGÚN LOS TEJIDOS

Generalmente, para determinados tipos de muestras se suelen hacer ciertas técnicas. Incluso, hay pequeños protocolos en el Servicio dependiendo del tejido en cuestión:

Técnicas Renales:

Hematoxilina-eosina, PAS, tricrómico de Masson, plata metenamina, e inmunofluorescencia (IgG, IgA, IgM, CD3)

Técnicas hepáticas:

Hematoxilina-eosina, PAS-diastasa, tricrómico de Masson, orceína, Hierro (cortes a 5µ), Wilder (cortes a 3µ) e inmunología (hepatitis C, B, HVC, HBC, HBS)

Técnicas de ganglios:

Hematoxilina-eosina (dejando menos tiempo en la hematoxilina, con 1 minuto o poco más es suficiente), Giemsa, PAS y Wilder.

Técnicas de médula ósea:

Se recibe en un fijador comercial:

·A = B5 modificado; se tiene en éste 2 horas y se lava bien.

·B = E.D.T.A. en buffer ácido; se tiene como mínimo 2 horas y a continuación se mete en el procesador de tejidos.

Hematoxilina-eosina y Giemsa.

Técnicas de endometrio:

1.Se recibe en alcohol de 96º

2.Alcohol de 100º durante 24 horas 3.Toluol, 6 horas

4.Se mete en parafina en estufa a 60º hasta el día siguiente.

5.Se hace el bloque

6.Hematoxilina-eosina y Carmín de Best.

Técnicas de piel:

Hematoxilina-eosina con permanganato potásico:

  • Permanganato potásico ácido, 15 min.

  • Decolorar con ácido oxálico

  • Hematoxilina de Carazzi, 2 min. Lavar

  • Eosina, 6-7 pases. Lavar

  • Deshidratar, aclarar y montar.

  • 2. HEMATOXILINAS

    2.1. Hematoxilina férrica de Weigert

    Solución A: Hematoxilina ----------------- 1 g.

    Alcohol 96º ------------------- 100 ml.

    Dejar madurar mínimo 15 días.

    Solución B: Percloruro de hierro ----------- 4 ml.

    Ác. Clorhídrico ----------------- 1 ml.

    Agua destilada ------------------ 95 ml.

    ·Solución de trabajo: Mezclar las soluciones A y B a partes iguales en el momento de usar; la mezcla dura aproximadamente 30 min.

    2.2. Hematoxilina iodada

    Hematoxilina ------------------------------------ 3 g.

    Alcohol etílico ----------------------------------- 25 ml.

    Agua destilada ----------------------------------- 500 ml.

    Yodo metálico 1% ------------------------------ 100 ml.

    Alumbre amoniacal saturado ------------------ 150 ml.

    ·Mezclar todos los componentes y se hierven.

    2.3. Hematoxilina de Mayer

    Hematoxilina ------------------------------- 5 g.

    Alumbre potásico amoniacal ------------- 50 g.

    Agua destilada ------------------------------ 700 ml.

    Glicerina ------------------------------------- 300 ml.

    Iodato potásico ------------------------------ 0,5 g.

    Ácido acético -------------------------------- 20 ml.

    ·Mezclar todos los componentes, echando poco a poco al final el ácido acético.

    ·Para disolver bien los componentes, hervir los 3 primeros junto con el iodato.

    3. COLORACIONES PARA TEJIDO CONJUNTIVO

    3.1. Tricrómico de Masson.

    Reactivos:

  • Solución de alumbre férrico 5%

  • Hematoxilina de Weigert

  • Solución de ác. Pícrico: ácido pícrico a saturación --------- 2 partes.

  • Alcohol de 96 ----------------------- 1 parte.

  • Fucsina ácida - xilidina de Ponceau: 1 parte de fucsina y 2 de xilidina.

  • Fucsina ácida:

  • fucsina ácida --------------- 1 g.

    Ác. Acético glacial ------- 1 ml.

    Agua destilada ------------- 100 ml.

  • Solución Xilidina de Ponceau:

  • Xilidina de Ponceau ------- 1 g.

    Ác. Acético glacial -------- 1 ml.

    Agua destilada ------------- 100 ml.

  • Solución ácida de ácido fosfomolíbdico al 1 %

  • Solución verde luz: Verde luz ------------------ 1 g.

  • Ác. Acético glacial ------ 1 ml.

    Agua destilada ----------- 100 ml.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Alumbre férrico en estufa a 60º, 30 min.

  • Lavar.

  • Hematoxilina de Weigert, 5 min.

  • Lavar en agua corriente.

  • Diferenciar en alcohol-ácido pícrico, 10 min.

  • Lavar 10 min.

  • Fucsina-xilidina de Ponceau, 5 min.

  • Lavar.

  • Ácido fosfomolíbdico, 5 min.

  • Sin lavar

  • Verde luz, 10-12 min.

  • Lavar

  • Deshidratar, aclara y montar.

  • Resultados:

    Núcleos en negro; citoplasma en rosa

    Fibras musculares en rojo

    Colágeno en azul

    3.2. PTAH de Mallory.

    Reactivos:

  • Hematoxilina fosfotungstica

  • ·Hematoxilina -------------- 0,1 g.

    ·Ác. Fosfotungstico -------- 2 g.

    ·Agua destilada ------------- 100 ml.

    Se disuelve por separado y luego se mezclan para que madure rápido. Se pueden añadir unos cristales de permanganato potásico.

  • Mezcla para postcromado

  • ·Cromato potásico sol. ac. 3% --------------- 3 partes.

    ·Ác. Clorhídrico sol. ac. 10% ---------------- 1 parte.

  • Permanganato potásico ácido

  • ·Permanganato potásico sol. ac. 0,5% ------------ 47,5 ml.

    ·Ác. Sulfúrico sol. ac. 3% -------------------------- 2,5 ml.

  • Ác. Oxálico al 1%.

  • Técnica:

  • Desparafinar e hidratar. Lavar y eliminar los restos mercuriales del material fijado en Zenker.

  • Postcromado, 30 min.

  • Lavar muy bien.

  • Diferenciar con permanganato potásico ácido, 1 min.

  • Lavar

  • Blanquear con ácido oxálico 1%

  • Lavar muy bien

  • Hematoxilina fosfotungstica 12- 24 horas. Portas invertidos

  • Derramar el colorante; secar en papel de filtro

  • Deshidratar rápido en alcohol de 96º, 100º; aclarar y montar.

  • Resultados:

    Fibrina, neuroglía y hematíes en azul oscuro

    Núcleos en azul brillante

    Colágeno rosado o rojo

    Estriación muscular en azul-negro

    El balance rojo-azul depende del postcromado y de la eliminación del cromato

    con el permanganato; cuanto más cromato se deje, más azul oscuro se verá.

    3.3. Van Gieson

    Reactivos:

  • Hematoxilina de Weigert

  • Picrofucsina

  • ·Fucsina ácida 10% --------------------------------- 5 ml.

    ·Ác. Pícrico sol. alcohólica a saturación --------- 100 ml.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar. Si proceden de congelación se pasa por alcohol de 96º, 3 min y lavamos en agua.

  • Hematoxilina de Weigert, 1-4 min. No más tiempo

  • Lavado en agua hasta color azul. No usar amoniaco para acelerar el viraje.

  • Picrofucsina, 1 min

  • Lavado rápido en agua destilada

  • Deshidratar, aclara y montar

  • Resultados:

    Fibras colágenas en rojo brillante

    Núcleos en azul o negro

    3.4. Orceína.

    Reactivos:

  • Mordiente: Permanganato potásico ácido

  • Permanganato potásico -------------------- 0,15 g.

    Ácido sulfúrico concentrado -------------- 0,015 ml.

    Agua destilada ------------------------------ 100 ml.

  • Ác. Oxálico al 2 %

  • Orceína

  • Orceina --------------------- 1 g.

    Ác. Clorhídrico conc. ----- 0,6 ml.

    Alcohol 70º ----------------- 100 ml

    Disolver la orceina en alcohol de 70º y luego añadir el ácido clorhídrico. Dejar madurar 2 días.

  • Alcohol-ácido:

  • Ácido clorhídrico -------------- 10 g.

    Alcohol absoluto --------------- 100 ml.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Mordiente, 3 min.

  • Ácido oxálico, 5 min.

  • Lavar en agua

  • Orceína, 20-30 min.

  • Lavar en alcohol de 96º hasta quitar el exceso de color

  • Lavar en alcohol-ácido

  • Hematoxilina para contrastar, si se desea

  • Deshidratar, aclara y montar

  • Resultados:

    Fibras elásticas: desde un tono púrpura hasta el marrón o negro.

    3.5. Gallego

    Fijación: Preferiblemente en formalina o Bouin.

    Cortes: En parafina o por congelación

    Reactivos:

  • Gallego nº 1:

  • Agua destilada ----------------------- 10 ml.

    Formalina comercial ---------------- 2 gotas.

    Ác. Nítrico ---------------------------- 1 gota.

    Cloruro férrico 10 % ----------------- 1 gotas.

  • Gallego nº 2:

  • Agua destilada ----------------------- 10 ml.

    Ác. Acético --------------------------- 2 gotas.

    Fucsina fenicada de Ziehl ---------- 25 gotas.

  • Solución de Picro-Indigo Carmín.

  • Ác. Pícrico a saturación en agua, se añade Índigo de Carmín al 1% y se comprueba el color con papel de filtro en relación con la que ya tengamos hecha en el laboratorio.

    Técnica:

  • Los cortes por congelación se lavan en agua.

  • Los cortes en parafina, se desparafinan e hidratan.

  • Sensibilizar con gallego nº1, 10-30 segundos.

  • Sin lavar, se agrega el Gallego nº2. Hay que controlar el color al microscopio. Aprox. 15 min.

  • Lavar muy bien en agua destilada

  • Virofijación en gallego nº1, 5 min.

  • Lavar en agua destilada y contrastar con Picroíndigo Carmín

  • Lavar

  • Deshidratar, aclarar y montar.

  • Resultados:

    Las fibras elásticas se tiñen en violeta oscuro

    Núcleos en violeta. Cartílago y moco en azul violeta

    3.6. Plata Metenamina. Para riñón.

    Reactivos:

  • Solución madre de plata:

  • Nitrato de plata 0,5% ---------------- 2,5 ml.

    Metenamina 3% ---------------------- 50 ml.

    Borax 5% ------------------------------ 3 ml.

    ·Mantener por separado hasta usarla

  • Diferenciador:

  • Ácido sulfúrico 0,5% -------------- 1 parte

    Sulfato férrico 0,2% ---------------- 1 parte

    Para desinfectar el material de cristal que se utiliza durante toda la técnica, empleamos una mezcla crómica que se pone el día anterior. Antes de usar, se lava bien.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Ác. Periódico 0,5 %, 10 min.

  • Lavar en agua

  • Ác. Crómico 5%, 45 min.

  • Lavar en agua corriente, 1-2 min.

  • Bisulfito sódico al 2%, 1 min. Para eliminar el ác.crómico

  • Lavar en agua corriente, 5 min.

  • Poner los cortes en plata metenamina a 55-60ºC durante aprox. 2-3 horas. Se mira al microscopio cuando va cogiendo color tabaco oscuro, cada 10 min. Y se va controlando si se tiñen las membranas basales. Se ponen en agua destilada. Si la técnica es ligera, se mete otra vez en plata; si están muy teñidos, se trata con el diferenciador.

  • Lavar con agua destilada

  • Dorar con cloruro de oro al 0,2 %, 2 min.

  • Lavar en agua destilada abundante

  • Tiosulfato sódico al 3%, 2 min.

  • Lavar en agua destilada

  • Contrastar si se desea con hematoxilina o verde luz

  • Deshidratar, aclarar y montar.

  • 3.7. Reticulina

    Reactivos:

  • Permanganato potásico 0,5-1%

  • Ác. Oxálico 5%

  • Nitrato de plata 2%

  • Carbonato de plata - medio - piridinado

  • Formol 5%

  • Agua amoniacal. ·Amoníaco ------------- 1 ml.

  • ·Agua destilada -------- 100 ml.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Oxidar con el permanganato, 3-5 min.

  • Blanquear con el ác. Oxálico, 1 min.

  • Agua amoniacal, 30 seg.-1 min.

  • Nitrato de plata hasta tomar color tostado

  • Lavar en agua con piridina

  • Reducción en formol hasta gris homogéneo. Lavar

  • Deshidratar, aclarar y montar.

  • Resultados: Fibras reticulares en negro.

    3.8. Wilder

    Los cortes deben estar bien pegados al porta con albúmina o con calor.

    Fijación: Varios fijadores, incluso líquido de Helly

    Reactivos:

  • Permanganato potásico ácido

  • ·Permanganato potásico sol.ac. 0,5% ---------- 47,5 ml.

    ·Ác.sulfúrico sol.ac. 3% -------------------------- 2,5 ml.

  • Oxálico sol.ac. 1%

  • Baño argéntico de Wilder:

  • A 5 ml. de nitrato de plata al 10% se va gregando amoniaco 28% gota a gota hasta que el precipitado de color oscuro desaparezca y quede claro. A continuación se añaden 5 ml. de NaOH al 3% y se vuelve de color oscuro; se sigue añadiendo gota agota amoniaco 28% gota a gota hasta que vuelva a quedar claro y desparezca el olor a moniaco. Completar con agua destilada hasta 50 ml. Dura de 3 a 6 meses en nevera o a oscuras.

  • Cloruro de oro 0,2%

  • Tiosulfato sódico 5%

  • Alumbre férrico al 2%

  • ·Sulfato férricoamónico ---------------- 2 g.

    ·Agua destilada -------------------------- 100 ml.

  • Formol 10 %

  • Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Oxidar con permanganato potásico, 5 min.

  • Lavar en agua

  • Blanquear con ácido oxálico, 1 min

  • Lavar en agua

  • Alumbre férrico 2 %, 30 min.

  • Lavar bien en 2 cambios de agua destilada

  • Baño argéntico de Wilder, 30 seg.- 1 min.

  • Lavado rápido en agua destilada

  • Reducir en formol neutro 10%, 10 min.

  • Lavar (preferible agua destilada)

  • Si los cortes están poco impregnados, volver al paso 10

  • Cloruro de oro, 5 min.

  • Lavar

  • Fijar en tiosulfato sódico 10 min.

  • Lavar

  • Deshidratar, aclarar y montar

  • Resultados: Fibras reticulares en negro.

    4. COLORACIONES PARA HIDRATOS DE CARBONO

    4.1. PAS - diastasa

    En una cápsula de Petri se pone el porta con saliva sobre el tejido y unos papeles mojados al lado para conservar la humedad. Se deja en la estufa a 60ºC durante 30 min.

    Lavamos con agua corriente y seguimos haciendo un PAS rutinario.

    Lo que se produce es la digestión del glucógeno por la amilasa.

    4.2. Q.S.M.

    Es una técnica para queratina y sustancias mucinoides

    Reactivos:

  • Hematoxilina de Mayer

  • Ác. Clorhídrico (opcional)

  • Eritrosina

  • Azul celeste

  • Se dejan disolver durante la noche 5 g. de alumbre férrico (sulfato férrico amónico) en 100 ml. de agua destilada. Añadir 0,5g. de azul celestín y hervir durante 3 min. Enfriar y filtrar. Añadir 14 ml. de glicerina. Esta solución se conserva durante varios meses.

  • Verde alcian

  • Mezclar 50 ml. de solución acuosa al 1% de verde Alcián con 50 ml. de ác. acético al 1 % y añadir 20 mg. de timol. Filtrar antes de usar.

  • Azafrán etanólico

  • Triturar en un mortero 1 g de estambres secos de azafrán del Galtinais o 4 g de azafrán español. El azafrán se tritura con más facilidad si previamente se congela a una temperatura muy baja. El polvo, junto con 100 ml de etanol absoluto, se coloca en un matraz al que se adapta un condensador de reflujo, introduciéndolo después al baño María, donde se deja hervir durante 1 hora. La solución amarilla se decanta en un frasco apropiado y se vierte en el matraz otros 100 ml de etanol. Se hierve durante otra hora y se decanta la solución en el frasco para guardar. Esta operación se puede repetir más veces; se mezclan los extractos y se filtra la mezcla, obteniéndose una solución de color amarillo oscuro. La solución se debe conservar en un frasco bien cerrado.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Azul celeste, 5 min.

  • Lavar en agua

  • Hematoxilina de Mayer, 5 min.

  • Lavar en agua tibia o fría, 15 min

  • Ác. Clorhídrico opcional (mejor no usarlo)

  • Lavar

  • Eritrosina filtrada, 10-15 min.

  • Lavar en agua

  • Diferenciar en alcohol 96º

  • Lavar

  • Verde alcián, 5 min

  • Lavar en agua

  • Deshidratar rápidamente con alcohol 96º

  • Azafrán etanólico, 5 min

  • Alcohol 100º, 2 baños

  • Xileno y montar

  • Resultados:

    Núcleos en azul oscuro

    Mucopolisacáridos ácidos en verde

    Tejido conjuntivo en amarillo o naranja

    Queratina en rojo oscuro

    Otros elementos en diversos tonos de rojo

    4.3. Carmín de Best

    Reactivos:

  • Hematoxilina de Carazzi o de Harris

  • Solución madre de Carmín de Best

  • ·Carmín Gurr's --------------------- 8 g.

    ·Carbonato potásico ---------------- 1 g.

    ·Cloruro potásico ------------------- 5 g.

    ·Agua destilada --------------------- 60 ml.

    Si se utiliza Carmín de Best Gurr's, la solución madre es:

    ·Carmín de Best Gurr's ------------- 8 g.

    ·Agua destilada ----------------------- 60 ml.

    En ambos casos, se dejan hervir todos los componentes en un matraz de 200 ml. (5 min); cuidado al hervir no se salga. Se enfría y se agregan 20 ml de amoniaco puro. Se pone en el frigorífico y en frasco oscuro (1 - 2 meses).

  • Solución de trabajo de Carmín de Best

  • ·Amoniaco ------------------------------------ 2 partes

    ·Alcohol metílico ------------------------------- 3 partes

    ·Solución madre de Carmín de Best ------- 2 partes (filtrado)

  • Diferenciador de Best

  • ·Alcohol metílico absoluto ----------------- 40 ml.

    ·Alcohol etílico absoluto -------------------- 80 ml.

    ·Agua destilada ------------------------------- 100 ml.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Hematoxilina de Carazzi o Harris, 2 min.

  • Lavar

  • Solución de trabajo 20 - 30 min.

  • Diferenciador hasta que no salgan nubecillas de color

  • Deshidratar con alcohol absoluto, 5 min.

  • Aclarar y montar.

  • Resultados:

    El glucógeno aparece en rojo brillante

    Núcleos en azul

    Es una coloración muy caprichosa, falla rotundamente en ocasiones y en otras produce preparaciones muy bellas.

    4.4. Mucicarmin

    Reactivos:

  • Solución de Mucicarmín:

  • ·Carmín --------------------------------- 1 g.

    ·Hidróxido de aluminio --------------- 1 g.

    ·Alcohol etílico ------------------------ 100 ml.

    ·Cloruro alumínico anhídrido -------- 0,5 g.

    Se pone el carmín y el polvo de hidróxido alumínico en un recipiente; se agita y se agrega alcohol 50º y cloruro alumínico (previamente pulverizado en un mortero), y se coloca en baño a ebullición. Se hierve y agita durante 2 horas y media. Enfriar rápidamente y filtar. Es estable unos meses. Para uso hay que diluir la solución madre 1 : 4 con agua destilada. Se utiliza en pocas horas.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Hematoxilina de Carazzi, 5-15 min. Lavar en agua

  • Mucicarmín diluida, 15-20 min. Lavar en agua

  • Deshidratar, aclarar y montar

  • Resultados:

    Mucopolisacáridos ácidos en rojo

    Mucinas en rojo brillante.

    Núcleos en azul.

    4.4.1. Mucicarmín (Variante)

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Hematoxilina de Carazzi, 5 min.

  • Lavar en agua corriente, 5 min.

  • Solución de Mucicarín pura, 75 min. a 60ºC en estufa

  • Lavar en agua destilada

  • Solución Tartrazine, 1-3 seg.

  • Lavar en agua destilada

  • Deshidratar, aclarar y montar

  • La solución de mucicarmín se puede reutilizar 3-4 veces.

    4.5. Técnicas para el amiloide

    4.5.1. Rojo Congo

    Fijación: Alcohol, líquido de Carnoy y formol

    Reactivos:

  • Solución de cloruro sódico alcalino alcohólico

  • Se prepara con 40 ml. de alcohol 80º, se satura con NaCl. Se alcaliniza antes de usar añadiendo 0,4 ml de NaOH al 1%

  • Sol. de Rojo Congo alcalinizado

  • A 40 ml. de alcohol 80º se le añade NaCl hasta saturación y después con rojo Congo se alcaliniza antes del uso con 0,4 ml de NaOH al 1%

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar. Si se usa fijador mercurial se deben eliminar los restos mercuriales

  • Teñir con hematoxilina, 5-10 min. Lavar

  • Sol. NaCl alcalino alcohólico, 15 min. Hacerlo con los portas invertidos para evitar precipitados

  • Sol. Rojo Congo alcalinizado, 15 min.; con los portas invertidos.

  • Deshidratar en 3 baños de alcohol absoluto. Aclarar y montar

  • Resultados:

    Amiloide en rojo y muestra birrefrigencia a la luz polarizada

    Fibras elásticas ligeramente rojizas

    Núcleos en azul

    4.5.2. Violeta de Cristal

    Reactivos:

  • Cristal de violeta 0,1%

  • Ác. Acético en sol.ac. 1%

  • Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Cristal violeta, 10 min. Lavar en agua

  • Ác. Acético hasta que el amiloide aparezca en rojo púrpura y el fondo en azul.

  • Lavar en agua

  • Montar en gelatina glicerina

  • Resultados:

    El amiloide aparece en rojo púrpura.

    4.5.3. Tioflavina T

    Fijación: deben evitarse los fijadores que contengan mercurio ya que éste provoca autofluorescencia espontánea de múltiples estructuras.

    Reactivos:

  • Sol. de hematoxilina de Harris

  • Sol. ac. de tioflavina T al 1%

  • Sol. de ácido acético 1%

  • Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Hematoxilina de Harris, 2 min., para eliminar la fluorescencia espontánea del núcleo (el DNA es fluorescente y podría dar falsos positivos)

  • Lavar en agua corriente, 3 min.

  • Aclarar en agua destilada

  • Tioflavina T, 3 min.

  • Lavar en agua destilada

  • Diferenciar en ác. acético 1% en 2 cambios de 10 min. cada uno

  • Lavar en agua destilada y montar en medio acuoso, o deshidratar, aclarar y montar en medio no fluorescente.

  • Resultados:

    Amiloide: amarillo o verde amarillento, sobre un fondo oscuro o azul, dependiendo del filtro utilizado.

    5. COLORACIONES PARA EL SISTEMA NERVIOSO

    5.1. Nissl.

    Técnica:

  • Desparafinar hasta alcohol 96º

  • Azul luxol al 0,1% en alcohol más el 0,5% de ácido acético al 10%. Una noche a 60 ºC

  • Alcohol 96º para quitar el exceso del colorante.

  • Lavar con agua destilada

  • Diferenciar en carbonato de litio al 0,05%

  • Alcohol de 70º hasta diferenciar sustancia blanca de gris

  • Enjugar en agua destilada

  • Carbonato de litio hasta diferenciar completamente

  • Varios cambios en alcohol 70º

  • Lavar en agua destilada

  • Violeta de cresilo al 0,1% (añadir al usar 15 gotas por 100 ml. de ácido acético, filtrar y calentar a 60ºC), 6 min.

  • Diferenciar en alcohol 96º.

  • Aclarar y montar

  • 5.2. Kluber Barrera del Azul-Xilol

    Reactivos:

  • Solución 0,1% azul-xilol en alcohol 96º

  • Solución acuosa al 0,005% de carbonato de litio

  • Técnica:

  • Alcohol absoluto

  • Colorear con el azul-xilol a tª 60 ºC durante 6-18 horas

  • Enjugar con alcohol 70º y luego en agua

  • Diferenciar con carbonato de litio, 30 min.-2 horas.

  • Lavar en agua

  • Colorear los núcleos Rojo nuclear sólido (2-5 min).

  • Lavar con agua

  • Deshidratar, aclarar y montar

  • Resultados:

    Fosfolípidos en azul. Es probable que se coloreen igual los gangliósidos y cerbrósidos.

    6. COLORACIONES PARA PIGMENTOS

    6.1. Hierro

    Fijación: Recomendable el formol tamponado a pH 7

    Reactivos:

  • Ferrocianuro potásico sódico 2%

  • Ác. clorhídrico sol. ac. 2%

  • Solución de trabajo: a partes iguales 1 + 2

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Solución de trabajo, 3 veces de 10 min. cada una.

  • Lavar, dejar mucho tiempo en agua para que se oxide bien

  • Contrastar con eosina o fucsina diluida

  • Lavar en agua destilada

  • Deshidratar, aclarar y montar

  • Resultados:

    El pigmento férrico trivalente aparece de color azul oscuro o verdoso.

    6.2. Pigmento biliar

    Reactivos:

  • Reactivo de Stein

  • ·Lugol ------------------------------------- 2 partes

    ·Yodo, sol. alcohólica 7% -------------- 1 parte

    La sol. de lugol está formada por:

    ·Ioduro potásico ------------- 6 g.

    ·Agua destilada -------------- 100 ml.

    ·Disolver y añadir poco a poco 2 g. de yodo

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Stein 6-18 horas. Lavar

  • Decolorar con hiposulfito sódico 5%

  • Lavar en agua corriente, 5 min.

  • Pase rápido en safranina 0,5%

  • Lavar en agua y secar en papel de filtro

  • Deshidratar con acetona; acetona-xilol

  • Xilol y montar.

  • 6.3. Fontana. Para la melanina.

    Reactivos:

  • Solución de Fontana

  • Nitrato de plata al 5 % en agua destilada; se va añadiendo amoniaco gota a gota hasta que se disuelva el precipitado; tiene que quedar la solución transparente y no huela a amoniaco.

  • Solución de viraje: a partes iguales a + b

  • Cloruro de oro 0,2%

  • Sulfocianuro de amonio al 2% ----------- 3 ml.

  • Hiposulfito sódico ------------------------- 3 g.

    Agua destilada ----------------------------- 100 ml.

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Llevar al líquido de Fontana en oscuridad toda la noche.

  • Lavar en agua destilada, 10 min.

  • Líquido de viraje, 10 min. Lavar

  • Hiposulfito 5%, 5 min. Lavar

  • Contrastar con fucsina de Ziehl

  • Deshidratar, aclarar y montar

  • Resultados:

    Gránulos de melanina en negro o pardo oscuro.

    7. COLORACIONES PARA LÍPIDOS

    7.1. Oil Red O

    Cortes: Por congelación

    Reactivos:

  • Sol. madre a saturación del alcohol isopropílico con Oil Red O

  • Sol. de trabajo

  • ·Sol. madre filtrada ------------- 6 ml.

    ·Agua destilada ------------------ 4 ml.

    Se deja reposar 10 min. y se filtra sobre los portas.

    Técnica:

  • Los cortes por congelación se les deja en la solución de trabajo durante 10 ó 30 min., con los portas invertidos o flotando en ella

  • Lavar con mucho cuidado

  • Hematoxilina de Carazzi, 10 min

  • Lavar

  • Montar en gelatina glicerinada

  • Resultados:

    Lípidos en rojo.

    Núcleos en azul.

    7.2. Sudán negro

    Cortes: Por congelación

    Es una técnica para lipofucsinas tempranas.

    Reactivos:

  • Sol. de Sudán Negro saturado en alcohol 70º

  • 2. Fucsina de Ziehl diluida

  • Gelatina glicerinada o líquido de Apathy

  • Técnica:

  • Sudán Negro 30 min.

  • Lavar

  • Fucsina de Ziehl diluida, contrastar.

  • Lavar

  • Montar en gelatina glicerinada o líquido de Apathy.

  • Resultados:

    Grasas en rojo brillante. Núcleos en azul.

    8. COLORACIONES PARA LOS MICROORGANISMOS

    8.1. Gram

    Cortes: En parafina

    Reactivos:

  • Violeta de Genciana 1%

  • Lugol

  • Solución alcohol-acetona:

  • ·Alcohol absoluto ------------ 6 ml.

    ·Acetona ----------------------- 3 ml.

  • Fucsina de Ziehl muy diluida, 1% aprox.

  • Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Violeta de Genciana 1%, 8 min.

  • Lugol, 5 min.

  • Lavar en alcohol-acetona

  • Aclarar en agua

  • Contrastar con Fucsina de Ziehl

  • Deshidratar en alcohol absoluto, aclarar y montar

  • 8.2. Ziehl Neelsen.

    Cortes: En parafina

    Fijación: Varios; preferibles lo mercuriales o el formol neutro

    Reactivos:

  • Solución de carbolfucsina

  • ·Fucsina básica ------------------- 1 g.

    ·Alcohol etílico absoluto -------- 10 ml

    ·Ác. fénico fundido -------------- 5 ml.

    ·Agua destilada ------------------- 100 ml.

    La fucsina se disuelve en el alcohol y el fenol se disuelve en agua. Se mezclan las 2 y se filtra antes del uso.

  • Alcohol-ácido

  • ·Alcohol 70º --------------- 100 ml.

    ·Ác. clorhídrico ----------- 1 ml.

    Técnica:

  • Desaparafinar e hidratar

  • Carbolfucsina, 30 min en estufa a 60ºC ó 12 horas a temperatura ambiente

  • Lavar en agua

  • Decolorar con: solución de alcohol-clorhídrico

  • alcohol 96º

    agua destilada; hasta que no suelte colorante.

  • Lavar en agua

  • Contrastar con azul de metileno 1%, 1 min.

  • Lavar

  • Deshidratar, aclarar y montar

  • Resultados:

    Bacilos ácido-alcohol resistentes en rojo brillante

  • Método de plata metenamina.

  • Modificación de Grocott

    Reactivos:

  • Solución de ácido crómico 5% en agua destilada

  • Solución madre de plata metenamina

  • ·Metenamina sol. ac. 3% ------------ 100 ml.

    ·Nitrato de plata sol. ac. 5% --------- 5 ml.

    Agitar hasta disolver el precipitado. Guardado en frigorífico, dura meses.

    2.a. Sol. diluida de plata metenamina; (sol. de trabajo)

    ·Borax sol. ac. 5% --------------- 2 ml.

    ·Agua destilada ------------------ 25 ml.

    ·Sol. madre ----------------------- 25 ml.

    Preparar en el momento de uso

  • Bisulfito sódico 1%

  • Cloruro de oro 0,1%

  • Hiposulfito sódico 2%

  • Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Oxidar en ác. crómico, 60 min.

  • Lavar en agua destilada

  • Bisulfito sódico 1%, 1 min.

  • Lavar en agua corriente, 5 min.

  • Lavar con agua destilada

  • Sol. de trabajo a 48ºC, 60-90 min. Controlar el tiempo con el microscopio

  • Lavar en agua destilada, 3 cambios de 2 min. cada uno

  • Cloruro de oro, 5 min.

  • Hiposulfito sódico, 2 min.

  • Contrastar con hematoxilina o verde de metilo 1%. Lavar

  • Deshidratar, aclarar y montar

  • Resultados:

    Paredes del histoplasma y hongos en negro.

    Eritrocitos en pardo

    9. COLORACIONES PARA ADN Y ARN

    9.1. Verde metilo - pironina

    Fijación: Alcohol o líquido de Carnoy son los recomendados

    Reactivos:

  • Sol. de trabajo verde metilo pironina

  • Sol. verde metilo ---------------- 7,5 ml.

    Sol. de pironina ------------------ 12,5 ml.

    Tampón acetato ------------------ 30 ml.

    A. Sol. de verde metilo: sol. ac. 2%, agitando bien. Colocarlo en un embudo separador, se añaden 100 ml. de cloroformo y se agita furtemente. Hay que dejar reposar varias horas y extraer el cloroformo. Repetir la operación (2 ó 3 veces), hasta que se extraiga todo el color violeta

    B. Sol. de pironina ac. 2%

    C. Tampón acetato; pH = 4,8. 30 ml de sol. 1 + 20 ml. de sol. 2

    ·Sol. 1.: Acetato sódico 0,2 M. 1,64 g en 100 ml de agua destilada

    ·Sol. 2.: Ácido acético 0,2 M. 1,2 ml en 100 ml de agua destilada

    Técnica:

  • Desparafinar e hidratar

  • Sol. de trabajo verde metilo pironina, 10 min.

  • Derramar el colorante y secar con papel de filtro (no usar agua)

  • Deshidratar rápidamente con acetona absoluta

  • Aclarar con xilol al 10% en acetona absoluta

  • Aclarar con xilol al 50% en acetona absoluta

  • Aclarar en xilol puro

  • Montar en bálsamo

  • Resultados:

    El DNA se tiñe verde y el RNA en rojo.

    10. COLORACIONES PARA GRUPOS FOSFATOS Y CARBONATOS

    10.1. Von Kossa

    Fundamento:

    La plata se deposita en los complejos cálcicos dotados de grupos fosfatos o carbonatos presentes en el corte. La plata, una vez depositada, es reducida por la luz del sol, después de haber arrastrado toda la plata no fijada por medio del hiposulfito de sodio.

    Reactivos:

  • Nitrato de plata en sol. ac. 1%

  • Hiposulfito sódico al 5%

  • Safranina al 0,1%

  • Técnica:

  • Hidratar los cortes de parafina

  • Lavar bien en agua destilada

  • Sol. de nitrato de plata, a la luz, pero procurando que ésta no sea directa del sol, durante 10 - 30 min.

  • Enjuagaren sol de hiposulfito y dejar luego actuar ésta durante 10 - 30 min.

  • Lavar detenidamente en agua del grifo

  • Teñir durante 30 seg. Con safranina

  • Diferenciar y deshidratar en alcohol 96º y luego en alcohol absoluto

  • Aclarar en xilol y montar

  • Resultados:

    Los grupos fosfato y carbonato unidos al calcio, se tiñen de negro

    Núcleos en rojo y el resto del tejido en tonos rojizos más suaves

    INMUNOHITOQUÍMICA

    ¿Qué marcan estos anticuerpos?

    Actina: Células musculares: lisas, esqueléticas y cardíacas.

    Alfa-Fetoproteína: Positivo para células germinales. Se aplica para la identificación de hepatomas, carcinoma de testículo y ovario.

    ß-HGC (Hormona Gonadotropina Coriónica): Marca dicha hormona. Da positivo en: seminoma, carcinoma embrionario, coriocarcinoma, disgerminoma (Puede o no ser positivo); en los teratomas las células sincitiotropobásticas son ocasionalmente positivas para ß-HGC. El control positivo recomendado es placenta.

    BLA.36 (Antígeno Linfocito B): El antígeno definido por DAKO como BLA.36 ha sido descrito como una glicoproteína con una masa molecular de 36 kD. Es encontrado en células B inmaduros y activados, pero no en el resto de células B. El antígeno BLA.36 está también presente en la superficie de las células de Reed-Sternberg y sus variantes mononucleares, por ejemplo las células de Hodgkin. No se presenta en células T.

    CEA (Antígeno Carcinoma Embrionario): No es específico, se emplea (poco) para la diferenciación de adenocarcinomas, mesoteliomas o carcinomas renales, hepatocelulares y de origen protático.

    Cerb B2: Es positivo entre 15-30% de carcinomas ductales invasivos, virtualmente todos los casos de enfermedad de Paget y sobre el 70% de los carcinomas ductales “in situ”. Marca la membrana de las células tumorales.

    CD7: Marcador de linfocitos T, leucemias de linfoblastos T en niños.

    CD10: Diagnóstico de leucemias linfocíticas agudas y leucemias hematopoyéticas.

    CD15: Encontrado en los granulocitos maduros, células de Hodgkin y Reed Stenberg.

    CD 20 ó L26: Es un marcador de células B en sangre periférica y tejidos linfoides, tiñendo los citoplasmas de dichas células. En tejido linfoide, tiñe fuertemente inmunoblastos B y blastos de centros germinales. No reacciona con células no linfoides normales o malignas. La mayor parte de linfomas de células B son reactivos, al igual que células Reed-Sternberg en casos de la enfermedad de Hodgkin.

    CD 30: Se pone de manifiesto por las células de Hodgkin y Reed Stenberg en la enfermedad de Hodgkin, por células tumorales de la mayoría de linfomas de células grandes anaplásicas y por una proporción variada de células T y B activadas. Fuera del sistema linfo-hematopoyético, el antígeno CD 30 normalmente de positivo en carcinomas embrionarios.

    CD 31: Marcador de megacariocitos y ocasionalmente células plasmáticas. Marca débilmente zonas ocultas de células B, células T periféricas y neutrófilos (céls. endoteliales) Debido a su reactividad con las células endoteliales pueder ser eficaz en la evaluación de tumores vascularizados.

    CD 34: Tiñe el citoplasma de células endoteliales y reacciona con el colágeno de la membrana basal. El control positivo recomendado es el angiosarcoma.

    CD 35: Tiñe las células foliculares de centros germinales, macrófagos y podocitos glomerules renales. El CD 35 es ampliamente marcador en diferentes células, incluyendo eritrocitos, células B, monocitos y granulocitos.

    CD 45 ó LCA: Marca células linfoides y en menor medida macrófagos, histiocitos y granulocitos. La mayoría de las céls. B y T neoplásicas se tiñen positivas en leucemias y linfomas no Hodgkin, mientras que la mayoría de neoplasias mieloides y céls. eritroides son negativas.

    CD 68: Se emplea para la localización de macrófagos en una amplia variedad de tejidos humanos, incluyendo células de Kuffer y macrófagos en bazo, intestino, pulmón y médula ósea.

    Citomegalovirus: Reacciona con los núcleos de las células infectadas. Este anticuerpo no reacciona con otros herpes virus.

    CK AE1/AE3 ó Citoqueratina pool: Marca células epiteliales y específica de epitelios queratinizados.

    CK ! (o CK AE1, de bajo peso molecular): Marcador de células de origen epitelial. Puede ser útil en el estudio de la histogénesis de tumores indiferenciados.

    CK ! (o CK AE3, de alto peso molecular): Particularmente es apropiado distinguir carcinomas diferenciados de otras neoplasias no epiteliales.

    CK 7: Usado para distinguir entre carcinomas de ovario y colon entre hepatomas y colangio-carcinomas.

    CK 20: Reacciona con ciertos tipos de carcinomas como adenocarcinomas de colon, carcinomas de células transicionales de la vejiga y células Merkel de tumores de la piel. El control positivo recomendado es el carcinoma de colon.

    Complemento C3: Demuestra la presencia del C3 humano.

    Core ó HBc (Anticuerpo Anti antígeno Nuclear de la Hepatitis B): Reconoce el antígeno Core (nuclear) de la hepatitis B en tejidos hepáticos infectados. Marca el núcleo, aunque también ha sido visto en citoplasma perinuclear.

    Cromogranina: Este anticuerpo reconoce la Cromogranina A y otros polipéptidos afines a la cromogranina del hombre, mono o cerdo. Casi todos los tipos de tumores neuroendocrinos son reactivos. El control positivo recomendados es el páncreas

    Desmina: Este anticuerpo tiñe células musculares en tejido humano.

    ·Policlonal: Tiñe específicamente células musculares; tumores musculares como rabdomiosarcomas y algunos leiomiosarcomas, diferenciándolos de otros tejidos tumorales, linfomas, carcinomas y tumores de origen neuronal o de la glia.

    ·Monoclonal: Más usado para músculo liso.

    EMA (Antígeno de la Membrana Epitelial): Tiñe epitelios normales de varios tejidos, incluyendo la porción apical de epitelio glandular, y en menor medida el epitelio escamoso. Marcando es el más fuerte en el epitelio mamario (normal o neoplásico, primario o metástasis) También puede marcar mesoteliomas, meningiomas o neoplasias mesenquimales.

    Endoglina: Es un fuerte marcador de células endoteliales vasculares.

    EGF (Factor de Crecimiento Epidermal): Este anticuerpo reacciona con el 170 kD EGF receptor de glicoproteína transmembranosa. Los análisis inmunohistoquímicos de secciones tumorales muestran el EGF receptor en el 74% de células escamosas de carcinomas, 34% de adenocarcinomas, 33% de células grandes de sarcomas y 0% de células pequeñas y tumores carcinoides.

    Estrógenos Receptor (ER): Este anticuerpo tiñe el receptor de estrógenos nucleares en secciones tisulares por técnicas inmunohistoquímicas.

    Factor VIII: Anticuerpo anti antígeno Factor VIII que es un componente del complejo Factor VIII del que se han identificado 3 componentes: 1. Factor VIII con actividad precoagulante; 2. Factor VIII con capacidad antígena, y 3: Componente de Von Willerbrand.

    HBsAg (Antígeno Hepatitis B de superficie): Este anticuerpo reacciona positivamente en células infectadas por el virus tipo B de la hepatitis, en cirrosis y en carcinoma hepatocelular. El HbsAg está presente en el citoplasma de las células infectadas y es detectado en el suero de los individuos infectados durante el estado presintomático de la hepatitis B aguda.

    HBcAg (Antígeno Hepatitis B nuclear): Este anticuerpo reacciona con el antígeno de la hepatitis B nuclear. Es visto en el núcleo y no se detecta en el suero de individuos infectados aguda o crónicamente.

    HCV (Virus Hepatitis C): Este anticuerpo reacciona específicamente con el virus de la hepatitis C fijado por ELISA. Reconoce un antígeno citoplasmático del virus de la hepatitis C humano en tejidos infectados. No reacciona con el virus de la hepatitis A o hepatitis B detectados en biopsias.

    Herpes virus tipo I y tipo II: Es un virus perteneciente a la familia Herpesvitidae que incluye también a los Herpes Zoster, Citomegalovirus y Epstein-Barr. Todos los virus de esta familia crecen en el núcleo, aunque empiezan a desarrollarse en la membrana nuclear y causan infecciones latentes.

    HGH (Hormona del Crecimiento Humano): Este anticuerpo reacciona con la hormona del crecimiento humano y con las células de la glándula pituitaria. Se aplica para la tinción de las células productoras de la hormona del crecimiento, además de clasificar adenomas de la pituitaria.

    Ia (HLA-DR): Es un anticuerpo monoclonal de ratón IgG2a, Kappa. Tiñe predominantemente células B y reticulares en los folículos linfoides. En el resto del organismo, células B y monocitos. No marca las células T. Los controles positivos recomendados son: piel, amídalas y melanomas.

    HMB 45 (Anti-melanoma): IgG1 de ratón que reacciona contra antígenos citoplasmáticos de células melánicas. Reacciona en: melanomas, nevus displásicas, nevus de Spitz, actividad de la unión, melanocitos fetales y neonatales, melanocitos reactivos, hiperplasia melanocítica atípica, léntigo maligno, algunos neuroblastomas y los carcinomas de células claras. No reacciona en nevus intradérmicos ni melanocitos normales.

    Inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgG, IgM, Kappa, Lambda: Son anticuerpos monoclonales que pueden emplearse en técnicas inmunohistoquímicas (P.A.P o Peroxidasa Anti Peroxidasa) y de inmunofluorescencia. Son útiles en el diagnóstico de: leucemias, plasmocitomas, linfomas no Hodgkin (derivados de las células B); tempranas positividades de monoclonalidad en nódulos linfáticos de determinadas enfermedades inmunes (Síndrome de Sjörgrens, SIDA...). Diagnósticos diferenciales entre carcinomas indiferenciados y linfomas, entre plasmocitosis reactivas y plasmocitomas bien diferenciados, reacciones foliculares atípicas y linfomas foliculares. Detectar depósitos de inmunocomplejos en nefropatías glomerulares y lesiones cutáneas (lupus, pénfigo vulgar).

    IgA humana: Este anticuerpo reacciona con el  unida a la IgA humana. El control positivo recomendado: amígdala.

    IgM humana: Reacciona específicamente con  unida a la IgM humana. Control positivo: amígdalas.

    Insulina: Hormona polipéptica sintetizada por las células  de los islotes de Langerhans de páncreas endocrino. Este anticuerpo se puede usar para la identificación de células  del páncreas normal y en tumores de origen en dichas células, el insulinoma.

    Kappa ó Kappa de Cadena Ligera: Este anticuerpo es empleado para detectar la inmunoglobulina Kappa (citoplasmática) en células B normales o neoplásicas. Pero la Ig Kappa extracelular también puede ser teñida. No reacciona con la Lambda de Cadena Ligera (ó Lambda). El control positivo recomendado: amígdalas, que contiene abundantes células plasmáticas; la lámina propia del intestino también es rica en células plasmáticas.

    Ki 67: Este anticuerpo reacciona con un antígeno nuclear humano expresado en todas las células proliferantes. El control positivo recomendado es el linfoma.

    Lambda ó Lambda de Cadena Ligera: Este anticuerpo se emplea para detectar la inmunoglobulina se superficie en células B normales y neoplásicas. Pero la Ig Lambda extracelular también teñirse. El control positivo recomendado para este anticuerpo es piel o adenocarcinoma.

    L26 ó CD 20: Es un marcador de células B en sangre periférica y tejidos linfoides, tiñendo los citoplasmas de dichas células. En tejido linfoide, tiñe fuertemente inmunoblastos B y blastos de centros germinales. No reacciona con células no linfoides normales o malignas. La mayor parte de linfomas de células B son reactivos, al igual que células Reed-Sternberg en casos de la enfermedad de Hodgkin.

    LCA o CD 45: Marca células linfoides y en menor medida macrófagos, histiocitos y granulocitos. La mayoría de las céls. B y T neoplásicas se tiñen positivas en leucemias y linfomas no Hodgkin, mientras que la mayoría de neoplasias mieloides y céls. eritroides son negativas.

    Lisozyma: Enzima bacteriolítica sintetizada en células mieloides, monocitos e histiocitos. Tiñe: histiocitos, células gigantes (Gaucher's, células xantomatosas y células gigantes en áreas de necrosis), histiocitos epiteliodes (sarcoidosis, tuberculosis y Crohm's).

    La enzima estará presente en leche, lágrima, saliva y suero.

    En intestino delgado fijarán el contraste de células de Paneth, las de Kuffer en hígado, túbulos proximales de riñón, acinos de glándulas lacrimales, células serosas de glándulas salivares, base de células epiteliales de los acinos secretores en glándulas mamarias durante la lactancia, lágrimas cartilaginosas, histiocitos en nódulos linfáticos reactivos, histiocitos de tejidos de granulación, células gigantes del xantoma, histiocitos y eosinófilos del granuloma eosinófilo.

    Utilidad: evaluación de los desórdenes mieloproliferativos, detección de las neoplasias mieloides o monocitoides escasamente diferenciadas, identificación de linfomas malignos y de procesos tumorales constituidos por histiocitos típicos.

    MAM-6 (Proteína Globular Grasa de Leche Materna): Este anticuerpo reconoce la MAM-6, una muco-glucoproteína de >400kD que está principalmente en el glucocalix de la mayoría de células epiteliales glandulares y en el citoplasma, y en la membrana de la mayoría de células de carcinomas. El control positivo recomendado es el carcinoma de mama.

    Mioglobina: Proteína constituyente del músculo esquelético y cardiaco. Tiñe las fibras musculares estriadas y da positivo en rabdomiosarcomas.

    Miosina: Es específico para el músculo esquelético.

    MB1: IgG1 que reacciona contra antígenos de membrana de todas las células B, con excepción de las células plasmáticas y algunas células T maduras. No marca células T inmaduras.

    MB2: IgG1 que reacciona contra antígeno citoplasmático presente en todas las células B con excepción de las plasmáticas. Puede reaccionar con células endoteliales y varios tipos de células epiteliales. No reacciona con linfocitos T ni timocitos.

    MT1: IgG1 que reacciona contra antígeno de membrana presente en todas las células T. También puede reaccionar con: timocitos, monocitos, macrófagos, Langerhans, Kuffer, células mieloides, células mieloides y precursores reitrocitarios. No reacciona con linfocitos B maduros o activados.

    MT2: IgG1 que reacciona contra antígeno ligado a membrana presente en linfocitos T maduros no activados y células B maduras. También reacciona en ganglios linfáticos y bazo con los linfocitos del manto de los folículos linfoides y linfocitos del paracortex. No reacciona con los linfocitos T inmaduros y B activados de los centros germinales.

    Neurofilamentos: Filamento intermediario compuesto por 3 polipéptidos mayores de 210kD, 160kD y 68kD, aprox., presentes en dendritas y axones neuronales.

    El anticuerpo antineurofilamento va a ser una subclave de IgG1 y se fijará en células derivadas de la cresta neural (neuronas del sistema nervioso central y periférico)

    Da positivo para tumores de naturaleza neuronal, carcinomas pulmonares de células pequeñas y feocromocitomas.

    NSE (Enolasa Neuroespecífica): Anticuerpo monoclonal capaz de marcar un polipéptido III de 78 Kdaltons y su presencia en neuronas, células del sistema APUD y neoplasias derivadas de ellas. Estará presente en neuronas, células parafoliculares de tiroides, células cromafines de médula suprarrenal, pituitaria, islotes de Langerhans y pineal. Positividad: Neoplasias neuroendocrinas, feocromocitomas, tumores adrenales, paragangliomas, melanomas malignos, carcinomas de células pequeñas y carcinoides pulmonares, tumores pancreáticos, adenomas paratiroideos y neoplasias de estirpe neuronal.

    Papilomavirus humano (HPV): Anticuerpos de conejo frente a papilomavirus tipo I. El papilomavirus pertenece a la familia de los papovavirus de los que se han descrito 16 tipos de los papilomavirus humanos (esta clasificación está basada en la secuencia de polinucleótidos). Es específico en PVs humanos y animales. Visualmente la tinción es intranuclear.

    PCNA (Antígeno Nuclear de Células Proliferativas): Este anticuerpo reacciona con las células proliferantes en todos los tejidos humanos. Los controles recomendados son bazo, amígdalas y carcinomas.

    p-53: Este anticuerpo tiñe núcleos donde hay proteína p-53. No reacciona con fibroblastos normales. La proteína p-53 se presente en baja concentración en células normales, pero los niveles aumentan en algunos cánceres comunes. Por técnicas de inmunohistoquímicas ha sido detectada la acumulación de p-53 en carcinomas de mama, pulmón, colon, vejiga, estómago y testículo; sarcomas de tejidos blandos y melanomas.

    Polipéptido Pancreático: Polipéptido neuroendocrino II segregado por células de los islotes, que actúa inhibiendo la secreción de enzimas por el páncreas, incrementa la producción ácida por el estómago, ocasiona contracción de los ductos biliares y relajación de la vesícula biliar. Se emplea para tumores de células insulares.

    Progesterona Receptor (PR): Este anticuerpo tiñe mediante técnicas de inmunohistoquímicas los tejidos donde hay presencia de receptor de progesterona. La tinción de este anticuerpo monoclonal es principalmente nuclear. El control positivo recomendado es el carcinoma de mama, lobular o tubular.

    Prolactina: Es altamente específico para la molécula de prolactina. No reacciona con HCG, FSH, LH, TSH y HGH. El control positivo recomendado es la pituitaria.

    Proteína Ácida Gliofibrilar (GFAP): Este anticuerpo tiñe las células de la glía Bergman y astrositos.

    ·Policlonal: Reacciona con la GFAP del hombre, ratón y rata.

    ·Monoclonal: Este anticuerpo ha sido testado para la localización inmunohistoquímica de la GFAP del hombre, cerdo y rata.

    Proteína bcl-2: Este anticuerpo monoclonal está designado para la localización específica de la proteína humana bcl-2. Se emplea para determinar su existencia, no para dar un diagnóstico. Reacciona con linfocitos pequeños en áreas de células T y tejido linfoide, pero no con los centros germinativos. De cualquier modo, este anticuerpo reacciona fuertemente con el linfoma folicular, linfomas de alto grado de células B y T, linfoma linfoblástico y “linfoma Ki-1” (linfoma anaplásico de células grandes).

    PSA (Antígeno Específico de Próstata): Este anticuerpo reacciona con células del epitelio ductal prostático normal, o tejido prostático hipertrófico o neoplásico.

    PSAP (Fosfatasa Ácida Específica de Próstata): La fosfatasa prostática es una glicoproteína de 100 kD presente en la glándula prostática y sus secrecciones. Aparece concentrada en las vacuolas secretoras supranucleares del epitelio columnar prostático. Marca tanto a las células epiteliales benignas como a las malignas del parénquima prostático. Es positivo para hipertrofias y adenocarcinomas protáticos.

    S-100: Anticuerpo de conejo que reacciona contra un antígeno denominado S-100 (termolabil y soluble en soluciones de sulfato de amonio a pH neutro. Da positivo: ·en piel: células de Langerhans (Histiocitosis X), melanocitos (Melanomas).

    ·en sistema nervioso: astrositos, oligodendrocitos, neuronas, células ependimarias y células de la piamadre (astrocitomas, oligodendrogliomas, ependinomas, tumores neuronales).

    De forma genérica, marca células normales o tumorales de estirpe neuroectodérmica.

    Sinaptofisina: Este anticuerpo reconoce vesículas presinápticas de neuronas, cerebro, médula espinal, uniones neuromusculares, retina e islotes pancreáticos. Es detectado en células normales, reactivas y neoplásicas de tipo neuroectodermal y neuroendocrino, como feocromocitoma, carcinoma medular de tiroides, tumores del páncreas endocrino y tumores carcinoides.

    Tiroglobulina: Glicoproteína 19S de 650 kD sintetizada en el tejido tiroideo. Se emplea para procesos patológicos cuyo origen primario sean los folículos tiroideos.

    UCHL-1: Tiñe la mayoría de los timocitos, células T maduras, y células de la serie mielomonocítica (granulocitos y monocitos). Es negativo para células B normales. Se emplea para la identificación de células T normales y neoplásicas, y en el estudio de la activación de las células T.

    Ulex Europeus: Tiñe la pared vascular (endotelio) y las células precursoras de eritrocitos.

    Vimentina: IgG2A monoclonal de ratón. Marca filamentos intermediarios de células mesenquimales o derivados mesenquimales no del tipo