A) OBTENCIÓN DE ALMIDÓN Y ENGRUDO DE ALMIDÓN

FUNDAMENTO

El almidón es un polisacárido de la glucosa. Tiene un p.m. elevado y una estructura compleja, constituye la energía de reserva para las plantas. Por la dieta pasa a los animales y al hombre. Es el polisacárido que introducimos en la dieta en mayor cantidad. En el proceso de digestión se transforma en glucosa, pasa al torrente sanguíneo, atraviesa las membranas celulares y en forma de glucosa es energía de uso inmediato para la celula.

MATERIAL

Material para almidón:

-Erlenmeyer de 500cc.

-Cristalizador

-Tela porosa

-Rayador

Material para engrudo de almidón:

-Balanza electrónica

-vaso de precipitador

-Probeta

-Espátula

-Vidrio reloj

TÉCNICA

Obtención de almidón:

Pelamos una patata, la trituramos y la colocamos en un Erlenmeyer. Añadimos agua y agitamos fuertemente. El almidón pasa al agua. Lo filtramos con una tela porosa sobre un cristalizador. Lo dejamos un tiempo y cuando vemos que el almidón se ha depositado en el fondo, decantamos, lavamos el almidón 2 o 3 veces, dejamos secar, lo pesamos y lo guardamos. Pesa 5 kg.

Engrudo de almidón:

Pesamos 1 gr de almidón y añadimos 5 ml de agua, lo disolvemos bien y cuando ya se haya disuelto, añadimos 35 ml más.

Lo llevamos a ebullición, esperamos a que se enfrie y le añadimos 50 ml de agua.

B) RECONOCIMIENTO DE AZÚCARES

FUNDAMENTO

El reconocimiento de azúcares se basa en las reacciones químicas que tienen lugar entre los reactivos. Estos reactivos siempre originan cambios perceptibles por los sentidos: como son la aparición de color, los precipitados, desprendimiento de humos, olores...

Trabajaremos con - Glucosa (aldosa), fructosa (cetosa) = monosacáridos

• Almidón = polisacárido

Y con los reactivos: Fheling, Benedit, Selivanoss, Yodo.

REACTIVO FHELING

Esta prueba se basa en el carácter reductor que tienen los monosacáridos. Al infrentarse con reactivos oxidantes originan sustancias coloreadas.

El reactivo Fheling consta de dos disoluciones.

Fheling A= disolución de sulfato criptico.

Fheling B= disolución de tartrato sódico potásico disuelto en hidróxido potásico.

REACTIVO BENEDITT

Se basa en el carácter reductor que tienen los monosacáridos.

El reactivo Benedit es una disolución de sulfato crípico en hidróxido sódico y citrato sódico.

REACTIVO SELIVANOFF

Este reactivo esta formado por resorcina que va disuelta en ácido clorhídrico.

Cuando las cotosas hierven con ácidos orgánicos diluidos originan unos complejos que se combinan rápidamente con la resorcina originando un producto de condensación rojo brillante.

REACTIVO YODO AL 1%

Algunas polisacáridos son capaces de incorporar el ión yodo a su estructura espacial dando lugar a coloraciones más o menos intensas que sirven para reconocerlos.

MATERIAL

12 tubos de ensayo

Gradilla

Mechero Bumsen

Pinzas de madera

Pipetas

Pera succionadora

Probeta pequeña

REACTIVOS

Azucares- glucosa

Fructosa

Engrudo de Almidón

Reactivos- Fheling

Benedit

Selivanoff

Yodo 1%

TÉCNICA

REACTIVO FHELING

Ponemos respectivamente en tres tubos de ensayo 2 mm de almidón, 2 de fructosa y 2 de glucosa y etiquetamos los tubos.

Añadimos en cada uno de los tubos un ml de reactivo de Fheling (AyB) los llevamos a ebullición en el mechero Bunsen y observamos los resultados.

REACTIVO DE BENEDIT

Ponemos en tres tubos de ensayo respectivamente dos ml de almidón, glucosa y fructosa y etiquetamos.

Añadimos en cada tubo 2 ml de reactivo de Benedit para llevarlo a ebullición y observamos.

REACTIVO DE SELIVANOFF

Ponemos en tres tubos de ensayo respectivamente 2ml de almidón, dos de glucosa y dos de fructosa y después añadimos en cada uno de ellos 2ml de reactivo de Selivanoff.

Lo llevamos a ebullición y observamos.

REACTIVO YODO (1%)

Ponemos respectivamente en 3 tubos de ensayo 2ml de fructosa, 2 de glucosa y 2 de almidón. Añadimos después en cada uno de ellos 2ml de yodo al 1% y agitamos y observamos los resultados.

RESULTADOS

Las diferentes pruebas han arrojado los siguientes resultados:

Reactivos: R. Fheling R. Beneditt R. Selivanoff Yodo

Azúcares:

Glucosa: Agitado: Azul Azul Incoloro Rojo-

Calentado: Rojo+ Blanco+ Incoloro-

Fructosa: Agitado: Azul Azul Incoloro Rojo-

Calentado: Rojo+ Blanco- Naranja+

Almidón: Agitado: Azul Azul Incoloro Negro+

Calentado: Azul- Azul- Incoloro

C) HIDRÓLISIS ENCIMÁTICA DEL ALMIDÓN

FUNDAMENTO

Se basa en que el almidón es hidrolizable en presencia de encimas específicas y de ácidos.

Ésta hidrólisis que es natural en la digestión humana, es reproducible en el laboratorio. El almidón, mediante la acción encimática, se va rompiendo en unidades mas sencillas llamadas DEXTRINAS, que acaban a modo de maltosa.

MATERIAL

Una probeta.

2 tubos de ensayo.

REACTIVOS

R. de Benedit

Yodo al 1%

TÉCNICA

En un tubo de ensayo añadimos 1 ó 2ml de almidón y saliva (en la saliva hay encima PTIALINA que hidroliza el almidón).

Lo metemos en la estufa de cultivo a 37ºC durante media hora. Al sacarlo lo dividimos en dos tubos de ensayo y en uno añadimos 2ml de reactivo Benedit y lo llevamos a ebullición para después observar. En el otro añadimos 1ml de yodo y observamos.

RESULTADOS

Tras echar la gota de yodo observamos que no hay cambio alguno, al contrario se produce un cambio de color al añadir el Benedit pues pasa del azul pálido al blanco con lo que las pruebas son negativa y positiva respectivamente.

PRÁCTICA 2

Determinación de calcio en suero sanguíneo

A)SEPARACIÓN DEL CALCIO POR PRECIPITACIÓN

FUNDAMENTO

Es posible separa el ión calcio del suero por precipitación gracias al ión oxalato (C2O4-) La reacción que tiene lugar es la siguiente:

Ca2+ + C2O4- => Ca C2O4

MATERIAL

Pipeta

Pera

Centrífuga

Tubo cónico

TÉCNICA

En dos tubos de ensayo cónico a los que rotulamos 1 y 2 echamos 3,4 y 4,3ml de suero respectivamente. Seguidamente añadimos a cada tubo 3ml de oxalato amónico (NH4C2O4).

Lo dejamos en reposo 30 minutos que es el tiempo de reacción, mientras esperamos preparamos las siguientes disoluciones en matraces aforados:

50ml de oxalato amónico 0,3M

50ml de hidróxido de amonio0,3M

50ml de H2S04

100ml de permanganato potásico

Una vez pasados los 30 minutos centrifugamos los 2 tubos y tras esto los sacamos de la centrífuga. Podemos observar que en la base del tubo hay CaC2O4.

B)CUANTIFIACIÓN POR VOLUMETRÍA

FUNDAMENTO

Para cuantificar el calcio por volumetría, utilizaremos como patrón el permanganato potásico (KmnO4) 0,1M. La reacción que tiene lugar en el erlenmeyer se tiene que dar en un medio ácido para lo que añadimos ácido sulfúrico.

CaC2O4 +KmnO4 +H2SO4 => CaSO4 +MnSO4 +CO2 +H2O

MATERIAL

Pipetas Erlenmeyer pequeño

Bureta con soporte Centrífuga

Pera succionadora Gradilla

Baño María

REACTIVOS

50ml de hidróxido de amonio 0,3M

50ml de ácido sulfúrico 1N

100ml de permanganato potásico 0,001M

TÉCNICA

Decantamos el precipitado obtenido en la prueba anterior y añadimos a cada tubo 3ml de hidróxido de amonio (NH3OH) 0,3M. Lo ponemos en el agitatubos para volverlo a centrifugar y decantar.

Una vez hecho esto añadimos en dos tubos 3ml de ácido sulfúrico y lo agitamos fuertemente hasta que se disuelva del todo.

Después lo ponemos en dos erlenmeyer en los que previamente hemos rotulado 1 y 2. Lo ponemos al baño María para que se caliente y procedemos a la volumetría:

Un a vez calentado se valora con el permanganato potásico que habremos puesto en la bureta que previamente hemos limpiado con el permanganato.

El final de la valoración será visible cuando se produzca el cambio de color. Para poder observarlo mejor lo haremos sobre un papel blanco ya que lo vemos mucho mejor.

Las dos valoraciones hechas han gastado:

6,4ml de permanganato

7,1ml de permanganato

CÁLCULOS

Para preparar el NH4C2O4

M= g/pm pm= 124; 0.3= g/124 g= 1.86g de oxalato

l.dón 0.05

Para preparar el NH3OH

M= g/pm pm=35 d=0.91

l.dón

0.3= g/35 g= 0.52

0.05

d=m/v; 0.91= 0.52/v; v=0.57ml de hidróxido

Para preparar elHSO4

N=g/pm/val pm=98 d=1.84

l. dón

1= 9/98/2 g= 2.45

0.05

d=m/v; 1.84= 2.45/v; v=1.33ml de ácido

Para preparar KMnO4

M= g/pm pm=158

l.dón

0.001= g/158 g= 0.0158 de permanganato

0.1

RESULTADOS

Hemos cogido 3.4 y 4.3ml de suero.

Hemos gastado 2.6 y 3.1 ml de permanganato.

Nº eqs permanganato = Nº eqs calcio; N*V = g__

Pm/val

0.001*5*2.6 = gCa; g = 0.56g Ca; 0.64______ 2.6

40/2 x_________100; x= 16.47g Ca

0.001*5*3.1 = g__ g = 0.31g Ca; 0.31______3.1

40/2 x________100:x = 10g Ca

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