PATOLOGÍA

SÍNTESIS DE COLESTEROL

1) La TIOLASA cataliza la formación de Acetoacetil CoA a partir de 2 Acetil CoA.

2) La HidroxiMetilGlutaril Sintetasa (HMG CoA Sintetasa) añade una nueva molécula de Acetil CoA, originando el HMG CoA.

3) La HMG CoA Reductasa cataliza una doble reducción,

o­r­i­g­i­n­a­ndo el Mevalonato. Esta enzima está fijada a la membrana del REL, con el sitio activo hacia el cito­plasma. Es el paso limitante y de regulación. También es el primer paso específico de la vía del colesterol, pues hasta ahora también podían formarse cuerpos cetónicos.

4) El mevalonato sufre dos fosforilaciones sucesivas originando 5-Pirofosfomevalonato.

5) Descarboxilación produciendo Isopentenil Pirofosfato.

6) El isopentenil puede originar un isómero: el Dimetilalil pirofosfato. Este compuesto es una unidad de isopreno.

7) Seis unidades de isopreno se condensan para formar el Escualeno. Es un proceso complejo catalizado por varios enzimas y con muchos productos intermedios.

8) El escualeno se pliega como preparación para su ciclización, originando el Lanosterol.

9) El Lanosterol se convierte en Colesterol a través de una compleja serie de 20 reacciones sucesivas.

REGULACIÓN:

EL punto de control es la HMG CoA Reductasa. Esta se regula a varios niveles:

- Inhibición de la enzima, que se produce al aumentar las concentraciones de:

+ Colesterol.

+ Ácidos biliares.

+ Mevalonato.

- Regulación de la expresión del enzima, que es inhibida por:

+ Colesterol.

+ Mevastativa, Lovastatina, etc.

- Control por fosforilación-defosforilación, en varios pasos:

+ La HMG CoA Red.KK fosforila a la HMG CoA Red.Kinasa, activándola.

+ La HMG CoA Red.K fosforila a la HMG CoA Reductasa, inactivándola.

Este proceso está controlado hormonalmente:

" La insulina promueve la defosforilación.

" El glucagón promueve la fosforilación.

LIPOPROTEÍNAS:

En el estado postabsortivo, los lípidos se reparten así en el plasma:

- 1/4 son TG (125 mg/100 ml).

- 1/2 es Colesterol (220 mg/100 ml), repartiéndose en:

" Colesterol esterificado (2/3)

" Colesterol libre (1/3)

- 1/4 son fosfoglicéridos (160 mg/100 ml), siendo la lecitina el mayoritario (70%)

Claro que los lípidos, al ser hidrófobos, no circulan libremen­te en el plasma, sino formando parte de las LIPOPROTEÍNAS.

- Núcleo, que contiene:

+ Colesterol esterificado.

+ TG

- Periferiam formada por:

+ Fosfolípidos.

+ Colesterol.

+ Parte hidrofílica de las Apoproteínas.

	Densidad	% Proteína	% TG	% Fosfolípi­do	% Colesterol
QM	*	1,7	96	0,8	1,7
VLDL	**	10	60	18	15
LDL	***	25	10	22	45
HDL	****	50	3	30	18

PRUEBAS DE EXPLORACIÓN:

1) Electroforesis. Al someter una muestra de suero a electroforesis, se obtiene el siguiente patrón:

+ Las que más migran son las HDL, formando una banda alfa-1.

+ A continuación están las VLDL, formando una banda pre-beta.

+ Justo detrás están las LDL, formando la banda beta.

+ Los Quilomicrones, demasiado grandes, se quedan en el punto de origen, no migran. Por otra parte, en ayunas no hay QM y su banda no aparece.

2) Ultracentrifugación: Ponemos tubo con suero en la

c­e­n­t­r­í­f­u­ga. Vamos quitando de la superficie la frac­ción que haya ascendido, y seguimos hasta haber separado las tres fracciones. Pero resulta demasiado caro.

+ 17 horas a 106.000 g > VLDL en superficie.

+ 20 horas a 105.000 g > LDL en superficie.

+ 40 horas a 106.000 g con solución de densidad de 1,021 > HDL en superficie.

3) Ultracentrifugación en una solución con gradientes de densidad. Al terminar, cada fracción queda en una de las interfases entre soluciones de diferente densidad.

4) Airfuge de Bronzert. Es una pequeña centrífuga, muy potente, que en 2'5 horas logra separar en el mismo tubo las tres fracciones:

+ VLDL quedan en superficie.

+ LDL quedan en la mitad del tubo.

+ HDL quedan en el fondo.

5) Método Rouffy, en varios pasos:

+ Al suero se añade Concanavalina A (leptina A), que se une a APO E y APO B100 (es decir, se une a la LDL y VLDL).

+ Se centrifuga a baja velocidad durante 15

m­i­n­u­tos a 20 ºC. Como los complejos formados por la Con A con HDL y VLDL pesan más, precipitan en el fondo mientras la HDL permanece en suspensión.

+ Eliminamos el sobrenadante con la HDL. En el

p­r­e­c­i­p­i­t­ado del fondo, añadimos Metilgluco­sa, que tiene mucha mayor afinidad por la Con A y la desplaza de su unión con las lipoproteínas, que vuelven a estar en sus­pensión.

+ Volvemosa centrifugar a baja velocidad. En el

fondo precipita la metilcelulosa unida a Con A, mientras que VLDL y LDL quedan en suspen­sión en el sobrenadante.

6) Combinando 4 y 5, se obtiene el mejor resultado:

+ Se hace primero el Airfuge, con lo cual suben las VLDL a la superficie. Las retiramos.

+ Nos queda suero con HDL y LDL. Ahora usamos el método Rouffy, con lo cual LDL precipitan en el fondo mientras HDL quedan en el sobrena­dante.

CARACTERíSTICAS Y FUNCIÓN DE LAS APOPROTEÍNAS

* Apo A-I:

" Estructural.

" Cofactor de la LCAT (transferencia de lípidos)

* Apo A-II:

" Estructural

" Cofactor de la lipasa hepática

* Apo A-IV:

" ¿?

* Apo B-48:

" Estructural.

* Apo B-100:

" Estructural.

" Ligando para receptor.

* Apo C-I:

" Cofactor de la LCAT

* Apo C-II:

" Cofactor de la LPL

* Apo C-III:

" Inhibidor de la LPL

" Inhibidor de la captación del QM residual.

* Apo D:

" CETP (Cholesteryl Ester Transfer Protein)

* Apo E:

" Unión glicosaminglicanos.

" Ligando para receptor.

- QM: Apo A-1; A-2; A-4; B-48; C-1; C-2; C-3; E

- VLDL: Apo B-100; C-1; C-2; C-3; E.

- LDL: Apo B-100; C-1; C-2; C-3; E.

- HDL: Apo A-1; A-2; D; E.

+ Estructurales: Apo A-1; A-2; B-100; B-48.

+ Ligando para receptores: Apo B-100; E.

+ Cofactor enzimático: Apo A-1; A-2; C-1; C-2.

La Apo B-100 y Apo B-48 están codificadas por el mismo gen. Lo que ocurre es que:

- El hígado lee normalmente el gen, y general una proteína completa, la Apo B-100.

- En la mucosa intestinal hay una modificación postranscripcional que consiste en una desaminación que convierte una citosina en uracilo. Como consecuencia, se cambia un codon CAA por UAA, creándose un codon de termina­ción prematuro en el ARNm. Y solo se lee el 48% del gen original. El resultado es la B-48.

Una consecuencia de esto es que:

- Habrá mutaciones que afecten a B100 y B48, si es que se producen en la zona común.

- Pero otras solo afectarán a Apo B100. En este caso habrá QM pero no VLDL ni LDL.

Una apoproteína especial es la Apo (a), que forma parte de la lipoproteína (a). Se caracteriza por:

- Alta homología con el plasminógeno.

- Unida a Apo B100 por puente disulfuro.

- Interfiere en la unión de Apo B100 con su receptor.

- Interfiere con fibrinolisis.

- Participa en formación de la placa de ateroma.

- Relación con enfermedad coronaria.

DINÁMICA DE LAS LIPOPROTEÍNAS

a) Lípidos de la dieta:

- Los lípidos de la dieta son hidrolizados a monoglicéridos y FFA y absorbidos por el enterocito.

- El enterocito los reesterifica para formar TG.

- Los TG pasan al RE, donde se unen a otros lípidos y

apop­r­o­t­e­í­nas A y B-48 para formar el QM. Este, después de pasar por el Golgi, se secreta a la linfa, y por esta acaba llegando a la sangre.

- En la sangre, se les unen Apo E y C procedentes de los

QM.

- En los tejidos, la LPL de los capilares hidroliza los TG

originando FFA que se liberan a la sangre. Allí, parte se absorbe por los tejidos y parte se une a la albúmi­na. El colesterol no se toca.

- Queda un QM residual, que conserva el mismo colesterol que tenía pero menos TG. Por tanto, su porcentaje de Col es mayor.

- El QM residual devuelve las Apo C y A a los HDL.

- Los receptores hepáticos para E-B100 reconocen la Apo E del QM residual, y promueven su endocitosis.

b) Trasporte del colesterol endógeno a los tejidos:

- Hepatocito sintetiza Apo B100, E . Estas se ensamblan con TG (que provienen del exceso de FFA de la dieta). Para originar las VLDL, que se secretan a la sangre.

- Las VLDL también contienen ésteres de colesterol, que provienen:

+ Del propio hígado.

+ Transferido desde la HDL.

- Las HDL transfieren a la VLDL:

+ Ésteres de colesterol.

+ Apo C-2

- La LPL de los tejidos periféricos hidroliza los TG de la VLDL, liberando FFA que pasan a los tejidos.

- Como consecuencia se origina una IDL (Lipoproteína de densidad intermedia). Se caracteriza por:

" Tienen mayor % de colesterol.

" Pierde la Apo C-2

La IDL tiene 2 destinos:

+ Ser reconocida por los receptores hepáticos

para E-B100 y ser endocitada por el hepatocito.

(50%)

+ Ser procesada, probablemente por una lipasa en la superficie hepática, para originar LDL.

(50%)

- La LDL tiene todavía mayor % de colesterol, y carece de Apo E. Circulan durante días, pudiendo:

+ Ser reconocida por los receptores hepáticos

para Apo E-B100 y endocitada por el hepatocito.

(70%)

+ Pero el 30% se oxida o peroxida. Entonces ya no puede ser reconocido. Se deposita en los tejidos, donde lo fagocitan macrófagos de subíntima y endotelio (que lo reconocen por receptores ines­pecíficos).

c) Transporte de colesterol de los tejidos al hígado:

- Hígado y enterocito sintetizan la HDL primitiva (pre-beta HDL), con forma de disco, que contiene LCAT, A-1 y CETP.

- En los tejidos, la LCAT esterifica el colesterol de las membranas celulares en esta reacción:

Lecitina + Colesterol --> Lisolecitina + Éster de Col.

- Las HDL que contienen ésteres de colesterol ya son las alfa-HDL.

- La LCAT también esterifica el colesterol de VLDL y LDL, y lo mete en HDL.

- HDL entra en hígado, pero no por endocitosis. El coleste­rol que transporta acaba siendo excretado con la bilis.

- Si la HDL no entra en el hígado:

+ Colesterol esterificado para a VLDL y LDL.

+ CETP desesterifica colesterol.

TRASTORNOS DE LAS LIPOPROTEÍNAS PLASMÁTICAS

a) Deficiencias de las Apolipoproteínas

+ Apo A (Enf. de Tangier)

+ Apo B (A-beta-lipoproteinemia)

+ Apo C-2

+ Apo E

b) Deficiencias enzimáticas:

+ Lipoproteín Lipasa

+ Lipasa hepática

+ LCAT

c) Deficiencias de las proteínas de transferencia:

+ CETP

d) Trastornos del receptor de LDL.

TRASTORNO DEL RECEPTOR DE LDL

a) Estructura del receptor:

El receptor de LDL está codificado en el cromosoma 19, estando compuesto por 18 exones:

Exones 2-6 > Zona de unión a ligando. Está formada por 7

repeti­ciones de 40 aa ricas en Cisteína (6 Cys por repetición). En esta zona se pueden unir:

+ 1 molécula de B-100

+ Varias moléculas de B-48

Exones 7-14 > Zona con homología con el precursor de EGF.

400 aa. Contiene 3 regiones ricas en Cys.

Exon 15 > Zona glicosilada con enlace O-glicosídico. 58 aa.

Exon 16 y 17 > Región trasmembrana (22 aa)

Exon 17 y 18 > Dominio citoplasmático (50 aa) incluyendo el extremo COOH terminal.

b) Tipos de mutación:

Se conocen 130 mutaciones en el receptor, que afectan a diferentes fases en la síntesis y función del mismo:

1. Mutaciones que afectan a su síntesis en el RER (27). Son grandes delecciones o cambios en el patrón de lectura que provocan que se lea una cosa completamente distin­ta. Como consecuencia, no hay síntesis del receptor.

2. Mutaciones que interrumpen su transporte al Golgi (85).

Falla la glicosilación necesaria para su transporte. Como consecuencia, hay síntesis, pero se queda acumu­lado en el Golgi.

3. Mutaciones que impiden la unión al ligando (11).

4. Mutaciones que impiden la endocitosis (6). Son mutaciones que afectan a la cola citoplasmática, que se encarga de la unión a clatrina e internalización. La LDL se une, pero se queda pegada fuera, no entra.

5. Mutaciones que impiden el reciclaje del receptor (28).

El receptor se hace insensible al pH, de modo que no se separa del LDL al llegar al endosoma.

c) Consecuencias:

Las LDL no se retiran del plasma. Por tanto, se depositan en los tejidos (xantomas, placas de ateroma, etc).

d) Tratamiento:

- En homozigotos:

+ Transplante hepático.

- En heterozigotos:

+ Dieta pobre en colesterol.

+ Dar resina que liga ácidos biliares, de modo que interrumpe la circulación enterohepática y así "tira" del colesterol. Esto hará que aumente la síntesis de colesterol, luego no es completamente eficaz.

+ Por tanto, debe completarse con inhibidores de la MHG CoA reductasa (lovastatina, etc). Sin embargo, estos deben usarse con precaución pues:

" No sabemos que otras cosas inhibe

" Hay que tomarla de por vida.

" Tomarla muchas veces al día

" Efectos colaterales.