INDICE

• Introducción

• Definición

• Clasificación

• Aplicaciones

• Penfigo

• Penfigoide

• Liquen plano

• Enfermedad IgA lineal

• Eritema multiforme

• Lupus

• Ventajas y desventajas

DIAGNÓSTICO POR INMUNOFLUORESCENCIA

Introducción

El Ac que reconoce un Ag específico es un miembro de la familia de proteínas séricas denominadas inmunoglobulinas. Cada molécula de inmunoglobulina es un complejo de cuatro polipéptidos que forman una estructura simétrica a modo de Y, y contiene dos cadenas idénticas de bajo peso molecular llamadas cadenas ligeras, y otras dos de alto peso molecular, también idénticas, llamadas cadenas pesadas. Las cadenas están unidas por puentes disulfuro. Hacia el segmento amino-terminal cada cadena presenta una posición variable, que es por donde reconoce al antígeno y donde tiene lugar la reacción Ag-Ac.

Definición

La inmunofluorescencia es una técnica de inmunoanálisis basada en la reacción Ag-Ac. Se utiliza para el estudio de enfermedades ampollosas o inmunitarias. Se emplean Ac marcados con colorante fluorescente (fluorocromo) que los tiñe con el objeto de identificar determinados especímenes clínicos. El colorante fluorescente se conjuga con las inmunoglobulinas sin alterar la reacción Ag-Ac y permite visualizar los organismos teñidos bajo un microscopio de fluorescencia.

Las muestras suelen tomarse mediante una biopsia, un raspado… y deben ser remitidas a un laboratorio lo antes posible, en fresco, humedecidas con suero o PBS para evitar su desecación. Antes y durante su transporte pueden mantenerse en nevera pero nunca en un congelador.

La lectura de ambas modalidades de IF se hace con un microscopio de fluorescencia cuya luz excita al isotiocianato de fluoresceína haciendo que emita luz fluorescente de color verde. La observación de luz verde fluorescente “tiñendo” un objeto del porta indica la presencia del antígeno en la muestra o de anticuerpos específicos en el suero, según el caso.

Clasificación

• DIRECTA: sobre un porta depositamos una muestra que hemos obtenido mediante una biopsia, un raspado… y en ella buscamos la presencia de un antígeno determinado. A la muestra le añadimos Ac monoclonales conjugados con compuestos fluorescentes (conjugado) y si el Ag está presente en la muestra se va a unir al conjugado.

• INDIRECTA: sobre un porta que lleva pegado un antígeno conocido, añadimos el suero problema. Si éste contiene anticuerpos específicos, se unen al antígeno. Posteriormente se añade un suero anti-inmunoglobulina humana marcada con isotiocianato de fluoresceína (conjugado). El conjugado se une a los anticuerpos específicos.

Aplicaciones

En el diagnóstico de:

• Candidiasis

• Lesiones vesiculoampollosas: penfigo, penfigoide y eritema multiforme

• Liquen plano

• Lupus

• Patología de glándulas salivales: sialadenitis virales y parotiditis por citomegalovirus

• Enfermedad IgA lineal

Pénfigo

El pénfigo es una enfermedad ampollar intraepidérmica rara que se presenta en piel y mucosas. Las ampollas aparecen de manera espontánea y son relativamente asintomáticas, pero las lesiones se extienden y las complicaciones de la enfermedad originan gran toxicidad y debilidad.
La enfermedad se presenta casi de manera exclusiva en adultos de edad madura o avanzada y en todas las razas y grupos étnicos.

Pénfigo en mucosa yugal

Pénfigo en labio inferior

Pénfigo en lengua

Mediante la inmunofluorescencia directa se demostró la patogenia del pénfigo vulgar. En vivo se observó la unión de Ac a la sustancia intercelular del queratinocito.
La IgG se deposita en el espacio intercelular y se encuentra en el 100 % de las muestras de pacientes con enfermedad activa.
La inmunofluorescencia directa, realizada en la biopsia, muestra un patrón reticular a nivel del estrato espinoso debido al depósito de inmunoglobulinas IgG, IgM, C3 y fibrinógeno. En el 100 % de los casos aparece IgG y en la mitad de los casos el C3.

Patrón de fijación epitelial intercelular reticular en malla.

Se observan depósitos de anticuerpos fluorescentes en el contorno de los queratinocitos.

Imagen en panal de abeja correspondiente al penfigo vulgar.

Penfigoide

Comprende un grupo de enfermedades autoinmunes adquiridas caracterizadas por formación de ampollas subepidérmicas causadas por la síntesis de autoanticuerpos frente a un antígeno común, el antígeno del penfigoide ampolloso, producido por los queratinocitos basales. Ocurre en personas de edad avanzada y es poco frecuente en los jóvenes.

Penfigoide en paladar

Gingivitis descamativa por penfigoide

Depósito lineal de anticuerpos (IgG y C) a lo largo de la membrana basal.

Patrón de fijación lineal que sigue el trayecto de la membrana basal, con positividad para la Ig G en un alto porcentaje y en menor porcentaje para el C3, la Ig M y la Ig A. Este depósito lineal no es exclusivo de esta entidad.

Liquen plano

El liquen, es una enfermedad, inflamatoria, crónica y recurrente que afecta a piel y mucosas. Es padecida aproximadamente por el 2% de la población. Presenta un pico máximo entre los 35 y 55 años, siendo poco frecuente en jóvenes y excepcional en niños. Así mismo se ha observado una prevalencia en el sexo femenino en una proporción 2:1. De igual manera parece ser un padecimiento casi exclusivo de la raza blanca y poco frecuente en la raza negra.

Está caracterizado por papulas blancas agrupadas y placas reticuladas en mucosa labial, yugal o sublingual. Ocasionalmente pueden surgir erosiones o úlceras.

Mediante la técnica de inmunofluorescencia directa se evidencia la existencia de depósitos autoinmunes tanto en el liquen plano cutáneo como en la cavidad oral.

En algunos casos se puede encontrar marcada positividad antifibrina de forma lineal en la membrana basal así como para IgM, IgA, IgG y depósitos globulares a nivel de la dermis papilar para IgG, IgA, IgM y fibrina. Diferenciamos esta enfermedad del penfigo y del penfigoide gracias al elevado acumulo de fibrinogeno a nivel de la membrana basal.

Enfermedad IgA Lineal (EAL)

La enfermedad por depósito lineal de IgA es un proceso mucocutaneo crónico e infrecuente de origen autoinmune, caracterizado por depósitos lineales de IgA a lo largo de la membrana basal. En la mayor parte de los casos, junto a las lesiones cutáneas, aparecen lesiones orales y en otras mucosas. Se han descrito casos en los que la afectación se limitaba a la mucosa oral. Por ello es importante el conocimiento de esta patología a la hora de establecer el diagnóstico diferencial de las enfermedades mucocutaneas ampollares.

Lesión gingival

Immunofluorescencia directa. Patrón de depósito lineal de IgA 
en la zona de la membrana basal

Eritema multiforme

Reacción aguda que afecta a piel y a mucosas. Mediante inmunofluorescencia directa se revela la presencia de depósitos del factor C3 del complemento en la pared vascular.

Lupus

Es una enfermedad autoinmune crónica. El SI ataca a las células de organismo y a los tejidos produciendo inflamación y daño debido a la unión de autoanticuerpos a las células del organismo y al deposito de complejos Ag-Ac.

La inmunofluorescencia directa revela un patrón granular lineal subepitelial para IgA, IgG, IgM, C3 y fibrinógeno en un 75-100 % de los casos.

Ventajas

- Se pueden obtener resultados rápidos.
-No es necesario realizar cultivos.
-Se puede identificar microorganismos específicos en un grupo mixto.
-Determina la identidad de un organismo muerto.
-Es sensible.

Desventajas

-Costos en reactivo y equipo
-Debe ser realizado por personal muy especializado.
-Los resultados no son 100% específicos (como toda técnica serológica).

BIBLIOGRAFIA

• Medicina Bucal Práctica

• Medicina Oral

• Internet