Extracción del ADN de una cebolla

2º Bach. A

Objetivo de la práctica

El objetivo de la práctica es conseguir extraer el ADN de la cebolla

Introducción teórica

-Extracción del ADN

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas

- En primer lugar tienen que romperse la membrana plasmática de la célula eucariota para poder acceder al núcleo de la célula. En el caso de los vegetales también habrá que romper la pared celular.

- A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN.

-Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

Como el ADN se encuentra en todas las células de los seres vivos, incluyendo por supuesto los vegetales, intentaremos extraer esta importante molécula a partir de cualquier fruta.

El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnología.
Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).

El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno de los ingredientes tiene su propia función . la solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular.El líquido de lentillas elimina las proteinas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN

-EL ADN

El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso hay células con diferentes formas y funciones.

Esta formado por desoxirribonucleotidos (A,G,C,T). Que a su vez están formados por un azúcar- D desoxirribosa y un ion fosfato.

La proporción y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a los polinucleótidos.

El ADN presenta dos niveles de plegamiento que dan lugar a:

Estructura primaria:

Los polinucleótidos se forman entre las bases nitrogenadas de adenina, guanina , citosina y timina por enlaces covalentes de tipo fosfodiester. Así se forma un esqueleto de polidesoxiribosa-fosfato, de forma que queda un extremo con -OH 3´ libre y un extremo 5´ co un grupo fosfato libre.

Estructura secundaria

Tiene un empaquetamiento espacial pero no se altera.

Dentro de la estructura secundaria hay 3 modelos :

.El modelo de la estructura secundaria del ADN en forma de doble hélice dextrógira (forma B) . Las dos hebras son antiparalelas es decir si una presenta la dirección 5´->3´, la otra posee la dirección 3´->5´.

El conjunto se pliega sobre sí mismo obligado por los puentes de hidrógeno entre diferentes regiones de la molécula, hasta adoptar la conformación más estable, que es la de doble hélice. Este enrollamiento entre las 2 hebras de la doble hélice es destrógiro es decir gira a derechas y de tipo plectonémico, como si estuvieran trenzadas.

Las secuencias de bases son complementarias, pues hay una correspondencia entre las bases de ambas cadenas .La adenina sólo puede estar frente a la timina y la guanina frente a la citosina. Así las bases púricas están enfrentadas a las bases pirimidínicas y la unión se realiza por puentes de hidrógeno en los pares A=T y tres en los pares G-C

La correspondencia entre las bases es la causa de que las dos cadenas de la doble hélice de ADN posean secuencias complementarias.

Además los pares de bases están horizontales y el eje los atraviesa por el centro.

.Modelo hélice A: En este modelo los pares de bases nitrogenadas están inclinados hacia el exterior pero la hélice al igual que la del ADN B es dextrogiro

. Modelo hélice z : En este modelo las cadenas de adn no se enrollan en forma de doble hélice sino en forma de zig-zag.

Metodología

Materiales

-1 cebolla

-vaso de precipitados x 2 (250ml y 500 ml)

-cuchillo

-batidora eléctrica con vaso

-tubos de ensayo

-10 ml de detergente líquido de lavavajillas

-termómetro

-embudo

-papel de filtro

-100 ml de agua mineral

-3 g de NaCl

-5 g de bicarbonato sódico

-enzimas proteasas( líquido de lentillas)

- 20 ml de alcohol etílico muy frío

Procedimiento

En primer lugar cortamos la cebolla en trozos pequeños para poder batirla con facilidad. Después pesamos con la balanza 3 gramos de NaCl y 5 gramos de bicarbonato sódico. Depositamos todo esto con 10 ml de lavavajillas en un vaso de precipitados de 500 ml., le añadimos la cebolla y los 100 ml de agua mineral y lo batimos todo. Cuando ya la disolución esté bien batida lo ponemos a calentar al baño maría durante 15 minutos. Para ello necesitaremos el soporte, la placa de amianto y otro vaso de precipitados lleno de agua del grifo.

Cuando ya esté calentado tenemos que filtrarlo. Para ello cogemos papel secante para hacer el filtro. Con la medida de un embudo grande hacemos un círculo y lo plegamos progresivamente, como si fuera un acordeón. Ponemos el filtro dentro de nuestro embudo y pasamos la disolución de cebolla por el filtro. El liquido verde-amarillo sin espuma que nos quede (20 ml) lo ponemos en un tubo de ensayo. Más tarde le ponemos un poco de liquido de lentillas .Además tenemos que poner 20 ml de alcohol etilico pero muy frío ,que medimos en una probeta, y lo metemos en un tubo de ensayo. Luego pasamos el alcohol etílico de ese tubo de ensayo al otro pero de manera que el alcohol pase solo por las paredes del tubo de ensayo con un ángulo de 45º y vertemos muy despacio.

Cuando ya hayamos acabado con todo ese proceso cogemos un gancho y sacamos el ADN de la cebolla.

Parte experimental

En la primera práctica el resultado fue la obtención del ADN de la cebolla que era una sustancia gelatinosa transparente.En el tubo de ensayo, se apreciaba una parte transparente arriba y debajo de ésta una parte amarillenta.

Pero en la segunda no se produjo con éxito la extracción del ADN se veian las dos partes pero no conseguimos ver el ADN

Conclusiones

La primera práctica en sí salió bien aunque hay que decir que el adn de la cebolla no se veía muy claramente. Teníamos que agitar el tubo un poco para poderlo mejor.

Durante la práctica tuvimos algunos problemas con el filtro, que no estaba muy bien hecho y que no filtraba bien, por lo que tuvimos que hacer otro. Además también tuvimos complicaciones con la forma de poner el alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo.

En la segunda práctica el ADN no se vio y creemos que fue porque no utilizamos suficiente líquido de lentillas; sin embargo en los los pasos previos de la práctica anterior como por ejemplo la adición del alcohol con inclinación de 45º y el filtro sí que salieron bien.

Bibliografía

Libro de Biología de 2ª de bachiller edit. Bruño

www. Centros5.es

www.centraleureka.com