Efecto

del

PH

y

Temperatura

sobre

una reacción enzimática

• Objetivos:

• Medir la Actividad enzimática de B-Glucosidasa con respecto a temperaturas diferentes y Ph diferentes.

• Calcular la velocidad de reacción enzimática

• Medir la temperatura optima para la enzima.

• Medir el PH optimo de la enzima

• Hacer curvas de calibrado

• Realizar gráficos con ecuación de la recta, velocidad V/s Temperatura, velocidad V/s Ph.

Resultados:

Tabla de datos

M=8.81x; B=0.1014

A=8.81x + 0.1014

Para calcular la concentración de [PNF] :

Vinicial*Cinicial=Vfinal*Cfinal (V=velocidad , C=concentración)

Ejemplo de calculo [PNF]

[PNF]=(0.1*0.2)/3 =0.0066

*Para calcular el coef de extinción (mM)

A=* l*C

=8.81 (1/mM*cm)

Efectos de la temperatura

Tabla de datos

Calculo de la velocidad enzimática:

V(UI/ml)= (A/*l )*(1/t)*(V/v)*Fd

A= Absorvancia del tubo menos la absorvancia del control

*l =Pendiente de la curva de calibrado (8.60)

t = Tiempo (5 Min)

V= volumen del ensayo (E+S)

V= volumen de enzima (0.1 ml)

Fd = factor dilucion del ensayo =volumen total/volumen de ensayo

Fd=3ml/0.9+0.1=3

Calculo de tubo 1 (ejemplo):

V(UI/ml )=(0.474-(-0.009))/5.23*(1/5min)*(1ml/0.1ml)*3 =0.554 (UI)

Tabla de datos

Efectos del PH sobre la reacción enzimática

Tabla de datos

Cálculos de la velocidad de reacción enzimática:

Calculo de tubo 1 (ejemplo):

V(UI/ml )=(0.243-0.1)/5.23*(1/5min)*(0.1+0.9ml/0.1ml)*3 =0.164 (UI)

Tabla de datos