CONTROL DE LIMITE MICROBIANO

INTRODUCCIÓN

Los ensayos de control sobre la contaminación microbiana deben entenderse tanto de forma cuantitativa como cualitativa. Según esto, en los medicamentos y cosméticos no deben de haber agentes de enfermedades (especies patógenas), y el contenido se saprofitos no debe de sobrepasar los valores limites definidos, para evitar variaciones de un medicamento y/o un cosmético en cuanto a su aspecto, sabor, olor, estabilidad, consistencia, descomposición, intolerancia, disminución de actividad y otros.

TOMA DE MUESTRA

Los principios para tomar una muestra representativa en exámenes químicos y físicos, así como en ensayos en animales, son también válidos para los ensayos microbiológicos. Las muestras se tomarán asépticamente, evitando la posibilidad de contaminaciones secundarias. Realizadas por personal especializado.

La USP XXVI prescribe, para el examen microbiológico de un lote la toma de 03 muestras representativas, cada una conteniendo 10 mL o 10 G. De estas una muestra esta destinada a la determinación de número de gérmenes y 2 muestras, a la determinación del tipo de gérmenes.

La cantidad de 10 mL o 10 G deberá estar constituida por muestras individuales de cuyo contenido será a la vez de 1 mL o 1 G. Las muestras individuales deberán provenir de al menos 10 envases, o en caso de tratarse de material a granel, de por lo menos 10 recipientes.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

• LÍQUIDOS: Pueden ser soluciones verdaderas o suspensiones en vehículo acuoso, o alcohólico (no mas del 30 %). DILUIR.

• LÍQUIDOS INMISCIBLES, CREMAS, UNGUENTOS Y CERAS: Agregar cantidad mínima de un emulsificante (Tween 80, polisorbato 20 o triton). Homogeneizar. Calentar a 40 ºC. Proceder como una suspensión.

• Cuando contienen inhibidores utilizar el método de filtración de membrana, o agregar lecitina.

• Para el examen de número de gérmenes. La muestra deberá diluirse en forma rápida y homogénea, bajo condiciones estériles.

TECNICAS

• Técnica del recuento de placas.

• Técnica del NMP o tubos múltiples.

MEDIOS DE CULTIVO

• Agar peptona de soya y caseína digerido pH 7,3 ± 0,2

• Caldo peptona de soya y caseína digerido pH 7,3 ± 0,2

• Caldo lactosa pH 6,9 ± 0,2

• Agar Vogel Johnson

• Agar Cetrimide

• Agar MacConkey

• Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato (XLD)

• Agar Verde brillante

• Agar Bismuto sulfito

• Agar EMB

• Agar ENDO

• Agar dextrosa Sabouraud

• Agar tripticasa soya (TSA)

• Caldo tripticasa soya (TSB)

• Caldo Selenito-Cistina

• Caldo Tetrationato

DILUYENTE

Solución amortiguadora de fosfatos pH 7,2 ± 0,1 (USP XXVI)

PROCEDIMIENTO