1.- Identificar la molécula de ADN mediante un proceso de aislamiento.
Introducción.
El ADN es la molécula esencial para la vida ya que esta contiene el material genético, el que nos entrega todas y cada una de nuestras características físicas y sicológicas, además de la herencia entregada por nuestros padres.
Esta molécula está constituida por bases nitrogenadas, azúcar ( desoxirribosa y ribosa) y el fosfato. Las bases nitrogenadas son la guanina, la timina, la adenina y la citosina.
El ADN tiene una estructura de doble hélice y sus dos cadenas son antiparalelas
(una sube y la otra baja).
Materiales y Reactivos
Pistilo
Mortero
Pinzas
Gotero
Baqueta
Matraz
Ablandador de carne
Tubos de ensayo
Detergente
Gradilla
Cápsula de petri
Solución salina
Etanol
- Pipeta
Procedimientos Experimentales
1.- Destrucción del tejido celular.
Tomamos los embriones de las arvejas, los maceramos en un mortero. Luego le agregamos 2 ml. De solución salina hasta formar un homogeneizado. Los vertimos en un tubo de ensayo.
2.- Destrucción de las membranas celulares.
Vertimos 2 gotas de detergente liquido para lozas en el tubo de ensayo contenía la mezcla. Homogeneizamos hasta que la solución se puso viscosa y la dejamos reposar durante 10 minutos.
3.- Desnaturalización de las proteínas.
Agregamos una punta de ablandador de carne. La agitamos suavemente durante unos minutos.
4.- Extracción del ADN.
Agregamos delicadamente 4 ml. de etanol usando una baqueta. Con una pipeta sacamos del tubo suavemente las hilachas filamentosas de ADN.
Análisis
1.- ¿ Por qué se usaron arvejas congeladas?
Se usaron arvejas congeladas ya que estas, al estar congeladas, aceleran el proceso de destrucción de el tejido celular.
2.- ¿ Por qué se uso detergente para loza?
Este se utilizó para la destrucción de la membrana celular ya que sus componentes actúan como descomponedor de la membrana celular.
3.- ¿ Por qué se uso ablandador de carne?
Se utilizó este producto para desnaturalizar las proteínas, o sea, las desorganizaba principalmente las que se encuentran componiendo la carioteca y de esta manera se libera el ADN y quedan sueltos miles de organelos.
4.- ¿ Por que se uso etanol congelado?
Al igual que con las arvejas congeladas, este acelera el proceso de extracción del ADN haciendo que se presente en forma de hilachas filamentosas.
Dibuja el montaje de esta etapa del protocolo. Rotula adecuadamente.
- ¿ Qué observan?, ¿ a qué estructura corresponde?
Observamos dos fases: una muy concentrada y otra no tanto. Ambas de color verde. En la de menor concentración se pueden observar unas hilachas filamentosas.
Corresponde a la estructura de ADN, estas son hilachas filamentosas de ADN.
- ¿ Cómo es posible observar el ADN, si se trata de una molécula que se encuentra dentro de las células que son microscópicas? Explica con fundamento.
Es posible ver el ADN en la solución debido a que las moléculas de ADN, después de la desnaturalización de las proteínas, se agrupan formando hilachas filamentosas.
- ¿ Qué usarías para teñir y visualizar claramente el ADN del resto del contenido celular?
Usaría un colorante llamado azul de metileno el cual teñiría al ADN de color azul.
Conclusiones
1.- Las arvejas congeladas son necesarias para poder romper los tejidos con mayor facilidad debido a la crío fractura.
2.- El detergente para losa y el ablandador de carne son necesarios para destruir todas las estructuras que protegen al ADN.
Bibliografía
Solomon, Berg y Martin, Biología, V edición, Mexico, 1999, páginas 53, 54 y 55.