Separación de una mezcla de Colorantes mediante la Cromatografía

Cromatografia de columna. Cromatografia de capa fina. Procedimiento. Comprobación de la Eficacia

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Una cromatografía es una tecnica que permite la separacion de los componentes de la mezcla debido a la influencia de dos efectos:

  • La retención: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por la fase estacionaria.

  • Desplazamiento: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase movil.

Puede emplearse para conocer el numero de componentes de una mezcla y su idenfçtificacion por comparación de patrones.

Existe diversos tipos de cromatografias, dependiendo de la fase estacionaria y movil:

  • Cromatografia de adsorcion: en la que la fase estacionaria es un solido y la fase movil un liquido.

En funcion del soporte:

  • Cromatografia de columna.

  • Cromatografia de capa fina.

¿ Como se realiza una cromatografia en capa fina?

La mezcla a analizar se deposita a una pequeña distancia del borde inferior de la placa y se introduce en una cueta que contien la fase movil, lo cual asciende a lo largo de la placa por capilaridad, desplazandose los componentes de la mezcla a diferentes velocidades , lo que provoca su separacion. Cuando el frente del disolvente se halla proximo al extremo superior de la placa, , ésta se seca y se visualiza las manchas a simple vista si son coloreadas, con luz UV si los compuestos absorben este tipo de radiaciones o utilizando reveladores especificos.

La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha hasta el punto de partida. Cuanto mas polar sea un compuesto menor sera su Rf.

Rf = distancia recorrida por el compuesto / distancia recorrida por el eluyente.

¿Cómo se realiza una cromatografia en columna?

La columna de vidrio se rellena con la fase estacionaria. Una vez preparada la columna, la muestra es introducida con cuidado sobre la fase estacionaria y se añade el eluyente que forma la fase movil hasta que la columna esta casi llena y comienza la elucion (fenomeno de los componentes de la mezcla a lo largo de la fase estacionaria).

El liquido se recoge en tubos de ensayo. La mezcla se separa en bandas, si estos componentes son coloreados estas bandas se veran a simple vista. Si los productos no son coloreados, las distintas fracciones podran identificarse por capa fina.

OBJETIVOS

Identificacion de una mezcla de componentes por cromatografia de capa fina.

Separacion de una mezcla de componentes por una cromatografia de columna.

Conocer el efecto de la polaridad sobre la retencion de los distintos compuestos.

REACTIVOS

Agua destilada

Tolueno

Etanol 96%

Colorantes

Silicagel

PROCEDIMIENTO:

Cromatografia de capa fina

1.- Preparar unos 10 ml de agua- etanol (3-1), etanol y tuoleno.

2.- Tomar tres placas de CCF.

3.- En cada una de las placas de CCF, trazar con lapiz una linea recta (con una altura de 1 cm respecto al borde) y marcar donde se van a depositar las disoluciones.

4.- Pinchar las disoluciones de los colorantes de referencia y la mezcla problema sobre los puntos marcados con un capilar.

5.- Dejar que las manchas se sequen e introducirlas en la camara cromatografiaza que contien el eluyente.

6.- Cuando el eluyente haya ascendido las ¾ partes de la placa, esta se seca y se marca rapidamente con lapiz el nivle alcanzado.

La comparación de las manchas presentes en la disolución problema con las obtenidas para los colorantes puros nos indica la composición de la mezcla.

Cromatografia en columna:

A) Preparacion de la columna cromatografica.

1.- Se sujeta la columna a un pie por medio de dos pinzas.

2.- Prepara 120 ml de eluyente.

3.- Se pesan 10 gr de silicagel en un erlenmeyer de 100 ml y se les añade 40 ml del eluyente. Agitar con una varita hasta que se forma una jalea y echar rapidamente a la columna evitando la formación de las burbujas de aire.

4.- Abrir la llave d ela columna y dejar caer el eluyente a un erlenmeyer de 100 ml.

La columna no debe de quearse en ningun momento sin eluyente, asi que cerraremos la llave cuando el eluyente esta al nivel por encima del lechi de silicagel.

B) Introducion de la mezcla a separar.

5.- Tomar 0.5 ml de la mezcla problema. Con la ayuda de la pipeta Pasteur , adicionarla sobre la silicagel y mojando las paredes de la columna.

Abrir la llave para que la muestra se adsorba sobre la fase estacionaria y cerrarla cuando quede solo una pequeña cantidad de eluyente que evite que la zona de aplicación se seque.

6.- Lavar la probeta con un pequeño volumen (1ml) de la mezcla disolvente hasta arrastrar toda la disolución problema y adicionarla.

7.- Lavar las paredes de la columna haciendo pasar algunos mililitros de eluyente y dejar eluir de nuevo hasta que el disolvente llegue al nivel de la silicagel. Repetir esta operación una vez mas.

C) Elucion de la columna.

8.- Llenar con eluyente el volumen vacio de la columna.

9.- Abrir la llave y recoger lo que eluye la columna.

10.- Rellenar con eluyente nuevo, tantas veces como sea necesario para permitir la recogida de las diferentes fracciones.

Se observara colorante color naranja que se desplazara rapidamente por la columna, colorante de color rosa que se movera mas lentamente y el color azul se queda retenido.

Desechar los eluidos incoloros y recoger los de color naranja y rosa en erlenmeyers. Si se obrserva en la columan el solapamietno de las franjas de los productos en la elucion, se deberan recoger tantas fracciones como sean necesarioas para limitar al maximo el numero de fracciones con mezclas de productos.

D) COMPROBACION DE LA EFICACIA DE LA EFICIENCIA DE LA SEPARACION.

Se realizara una CCF en que se pincharan la mezcla problema y las disoluciones coloreadas eluidas de la columana. En funcion de los resultados de la CCF se deberian someter a una destilación. Dicho proceso se realizara a presion reducida ya que esta tecnica permite eliminar el disolvente a temperaturas inferiores.