Propagación de plantas

Morfogénesis in vitro. Germinación de semillas. Organogénesis

  • Enviado por: Arturo Ramírez Martínez
  • Idioma: castellano
  • País: España España
  • 4 páginas

publicidad
cursos destacados
Razonamiento Lógico y Matemático para ingresar a la U
Razonamiento Lógico y Matemático para ingresar a la U
Si necesitas una ayuda extra para entrar a la Universidad entonces tienes que estudiar el curso de "Razonamiento...
Ver más información

Cómo organizar tu horario con óptima eficiencia
Cómo organizar tu horario con óptima eficiencia
Que es para ti el tiempo? Tu manejas el tiempo o dejas que el tiempo te maneje y te pones nervioso pensando que no...
Ver más información

publicidad

TRABAJO DE CLASES PRÁCTICAS.”MORFOGÉNESIS IN VITRO”:EFECTO HORMONAL SOBRE LA ORGANOGÉNESIS DE DIFERENTES TEJIDOS Y ESPECIES.

.

DISTINTOS MEDIOS NUTRITIVOS ! DISTINTOS ORGANOS

MELON (variedades)

TOMATE (variedades)

AMARILLO ORO

MICROTON

AMARILLO CANARIO

P73

DOUBLON

SEMILLAS A GERMINAR

A las dos semanas tendremos las plántulas.

MEDIO DE GERMINACIÓN

Medio de MURASHIGE Y SKOOG (1962).

Composición:

MS I ( Macronutrientes )

Mg/l

NH4NO3

1650

KNO3

1900

CaCl2.2H2O

440

MgSO4.7H2O

370

KH2PO4

170

MS II ( Micronutrientes )

IK

0.83

H3BO3

6.2

MnSO4.4H2O

22.3

ZnSO4.7H2O

8.6

NaMoO4.2H2O

0.25

CuSO4..5H2O

0.025

CoCl2.6H2O

0.025

MS III ( Fe- EDTA )

EDTA

37.3

FeSO4.7H2O

27.8

Medio Germinación - 1 L

MS I - 100 ml

MS II - 10 ml

MS III - 10 ml

Inositol - 100 ml

Sacarosa - 10 gr

Se ajusta el pH = 5,7 (con KOH)

Agar !0,8 % ! Añadiremos 8 g/l

En probeta con 500 ml de agua destilada añadimos 4 gr de Agar.

Para fundir el agar se usa el microondas (tarda poco) o el autoclave (tarda mucho).

Se distribuye en tubos de ensayo antes de que solidifique, se ponen las tapas y se lleva al autoclave ! ESTERILIZA, a 121 oC durante 20 minutos.

Esterilización de semillas.

Melón ! hay que pelarlas antes. Acelera el proceso de germinación.

Tomate ! esterilización directa.

Tendremos cinco recipientes para esterilizar las semillas (uno vacío), el primero tendrá lejía al 20 % (comercial:40%), se dejaran las semillas reposar durante 20 minutos (50 ml: 25 H2O y 25 LEJIA).

Tras los 20 minutos se pasan las semillas con unas pinzas al segundo recipiente con 50 ml de agua destilada, y se dejan alli 5 minutos.

Pasados los 5 minutos se pasan las semillas al tercer recipiente con agua destilada, y se dejan allá 10 minutos. Pasados los 5 minutos se llevan las semillas al cuarto recipiente con agua destilada y se dejan allí durante 15 minutos.

Este método de pasar las semillas de recipiente a recipiente es para diluir los restos de lejía de las semillas.

En cabina de flujo laminar se haria bien la inoculación en el medio nutritivo de los tubos de ensayo, pero como no hay se flamean con alcohol las pinzas y los bordes de los tubos de ensayo.

Melón ! 1 semilla por tubo de ensayo.

Tomate ! 2 semillas por tubo de ensayo.

Medio de organogénesis.

Veremos como distintas concentraciones hormonales afectan a callos, brotes.

En un litro de agua destilada añadimos:

MS I

100 ml

MS II

10 ml

MS III

10 ml

Sacarosa

40 gr

Inositol

100 mg

Vitamina SH (complejo)

10 mgr

Luego añadimos hormonas, en mg/l, en distintas combinaciones:

1

2

3

4

5

AIA

0

0,4

4

0,4

4

Kinetina

0

0,4

0,4

4

4

PH=5,7

0,8 % Agar

Se introduce en el autoclave, esterilizando , y luego se aplican en placas de Petri.

Cada grupo prepara 400 ml de medio. 16 placas.

Cada grupo con 2 placas, una de tomate y otra de melón.

MEDIO DE ANTERAS.

De la planta Nicotiana glauca.

Medio de Nitsch & Nitsch (1969).

Del preparado comercial se pesan 2,1 gr/l.

NOSOTROS

1 litro

A

B

Preparado comercial

2,1

(AIA) 2 mg/l

---

Inositol

100 mg

(Kinetina) ---

2 mg/l

Sacarosa

20 g

Vitamina SH

10 ml

Enrasar a 200 ml

PH=5,7

Agar 0,8%

Se lleva al autoclave, esterilizando y se distribuye en 16 placas, 8 para A y 8 para B.

MEDIO DE CULTIVO DE EMBRIONES (Citricos).

En un litro de agua destilada añadimos:

MS I

100 ml

MS II

10 ml

MS III

10 ml

Sacarosa

40 gr

Inositol

100 mg

Vitamina SH (complejo)

10 ml

PH=5,7

Preparamos 200 ml y lo llevamos a 16 placas.

CULTIVO DE ANTERAS.

De plantas de Nicotiana glauca (o GANDUL).

Antes de nada determinaremos el estadio adecuado del polen ! MICROSPORA TARDIO o BINUCLEADO TEMPRANO.

Usaremos 6 estadios diferentes.

Anteras.

Gotas de carmin acético.

Varilla de vidrio (maza).

Estadios

1-TETRADA. Se esta produciendo la meiosis.

2-MICROSPORA.

3-BINUCLEADO.

4-MADURO.

Cada tamaño de flor me dara un estadio diferente.

TIPOS DISTINTOS DE FLOR SELECCIONADA:

Lejia 20% rebajada al 25% ! 15 minutos. 3 aclareos.

Se ponen sobre placas estériles, y se usan pinzas flameadas.

Cortamos con bisturí y las anteras directamente se ponen en placa de cultivo.

Medio A ! AUXINA

Medio B ! CITOQUININA

Plántulas de TOMATE ! cortamos en cuatro trozos los cotiledones.

Hipocotilo ! trozos 0,3 - 0,4 cm.

Los pasamos a los distintos medios preparados en la segunda práctica.

RESULTADOS DE MICROPROPAGACIÓN "IN VITRO".

Grupo: G-7.

Veamos los resultados en los distintos medios:

TOMATE.

1 -Placa compartida con melón.Uno con hojas. Con raíces.

2 -Con raíces.

3 -Un poco contaminado. Con menos raíces.

4 -Con callo. Sin raíces.

5 -No ha regenerado. Trozos muy pequeños.

MELÓN.

1 -Con callos. Sin raíces.

2 -Un propágulo con muchas hojas. Callos.

3 -Mucha formación de callo, sobre todo en tallos.

4 -Formación equilibrada, de callos con brotes y raíces.

5 -Está como quemado, muerto.Sin regeneración.

Medios cultivados por la profesora, e inoculados con cuidado evitando la contaminación microbiana.

Mejores medios ! MEDIOS 1 Y 5 PARA EL TOMATE, inoculándose trozos de hipocotilo.Se obtienen buenos desarrollos de plantas.

Mejores medios para el melón no se observan.

Como podemos observar existen diferencias visibles de Organogénesis en las dos especies utilizadas.

Para el melón la obtención de callos es muy baja.

PRACTICAS DE PROPAGACIÓN DE PLANTAS

1

1

MORFOGÉNESIS IN VITRO. FEBRERO 2001