Procesos

LCR. Glucógeno. Metacromasía. Tinciones. Impregnación. Colodionado. Microscopio electrónico

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PREGUNTAS DE TEORIA DEL EXAMEN DE RECUPERACION DE PROCESOS
  1. PROCEDIMIENTO DEL LCR SI TIENE CITOCENTRIFUGA. (PROTOCOLO)
  • El protocolo es el siguiente:
  1. Nº de registro ( C-nº de registro/año)
  2. Examen macroscópico
  3. Comprobar la celularidad con azul de toluidina.
  4. Concentración de células (sino hubiera las suficientes células) en la citocentrífuga:
  • Se rotulan los tubos
  • Se cargan con el líquido LCR problema
  • Se compensa la centrífuga colocándolos paralelamente en el caso de que no hubiera un nº par de tubos se cargarían con H2O (misma cantidad)
  • Se pone 5 minutos a 1500 W/minuto
  1. Si pasados los 5’ no hay sedimento suficiente se volvería a poner otros 5’.
  2. Los tubos se llevan a la gradilla
  3. Se elimina el sobrenadante por inmersión completa del tubo.
  4. Homogenizar con el LCR que queda en el tubo
  5. Con una pipeta previamente rotulada, se coge una gota de LCR y se hace una extesión previamente en un portaobjetos rotulado.
  6. Coloca en una cestilla en ol 96º
  7. Teñir con papanicolaus (P.P) o se secan al aire y se tiñen con Disk-quik.
  8. Montar
  9. Identificar con una etiqueta
  10. Examen microscópico.
  1. PROCEDIMIENTO CON UNA ORINA DE RUTINA EN LA CITOCENTRIFUGA (PROTOCOLO)
  • El protocolo es el siguiente:
  1. Se le da un nº de regristo ( C-nº de resgistro/año) y escribirlo en el frasco que tiene la muestra y en la hoja de petición .
  2. Examen macroscópico indicando (color, turbidez,..)
  3. Comprueba la celularidad con la tinción de azul de toluidina.
  4. Realizar un concentrado de células ( centrífuga, citocentrífuga) a 1500W/minutos un tiempo de 5’.
  • Cogemos un receptáculo y se rotula.
  • Se monta y se carga con la orina problema
  • Debe de cumplir para que funcione la citocentrifuga que estén en pares.
  • Sino se utilizan receptáculos de H2O con la misma cantidad llamando a este procedimiento compensar la citocentrifuga.
  1. Pasado el tiempo cuando se pare la citocentrifuga, se abre siguiendo las precauciones y sacamos los receptáculos y de ellos los portaobjetos con la extensión de orina.
  2. Fijamos en ol de 96º.
  3. Teñimos con papanicolaus (P.P)
  4. Aclaramos en xilol.
  5. Montamos y colocamos la etiqueta con la identificación.
  6. Examen microscópico.
  1. GLUCÓGENO: ¿CÓMO SE FORMA?.
  • El glucógeno es un hidrato de carbono, polisacárido, compuesto por moléculas de glucosa, que unen formando largas cadenas lineales. Constituye la reserva energética del organismo. Sintetiza hígado, siendo este el órgano donde se halla en mayor cantidad, seguido del músculo estriado y en el endometrio.
  1. REACCIÓN DE LA METACROMASIA
  • Metacromasia indica cambio de color. Cuando colorante químicamente puro tiñe selectivamente estructura tisular de color diferente al de la solución diluida de colorante, se dice ha ocurrido una reacción metacromática. Estructura responsable del cambio denomina cromotropa, para distinguirla restantes que se colorean normalmente (ortocromáticas).

Los colorantes metacromáticos son casi todos carácter básico de las mas importantes tenemos azul de toluidina, azul de metileno y tionina.

Cuando disolvente no es H2O sino ol, acetona,… posee tinte constante y se comportan como ortocromáticos, pero en solución acuosa, la coloración de la solución vuelve variable función temperatura elevada, colorantes comportan como ortocromáticos. Deducimos que paso de la forma ortocromática de un colorante a la metacromátca puede ser provocado pequeños factores, entre los que figura unión determinadas sustancias a través de mecanismos de atracción electrostática.

  1. FUNDAMENTOS TECNICOS TINCIONES TRICOMICAS EXPLICANDO NATURALEZA QUIMICA DE CADA UNO Y EXPLICANDO LAS DIFERENCIAS DE ESTOS SI LAS HAY.
  • Coloración específica diferencial sobre núcleos celulares, tejido epitelial y muscular y conjuntivo, producen diversas tinciones tricómicas, influyen factores, más importante el distinto grado permeabilidad ofrecen estructuras paso del colorante, dependerá grado dispersión tenga solución empleada. Tras proceso fijación tisular provoca reticularización proteica, proteínas citoplasmas celulares agrupan constituir malla poro fino, mientras fibras tejido conjuntivo, dibujan una red más laxa.

Partículas colorante pueden encontrar forma disolución verdadera ( caso colorantes utilizan teñir citoplasmas) o coloidal (colorantes conjuntivo), de su interacción red poros tisulares genera gradiente penetración distinto cada grupo colorantes en gran medida responsable diferente coloración cada estructura. Colorantes mas ultilizados diferentes tinciones tricómicas clasifican:

  • Colorantes nucleares: laca hmtx-ferrica
  • Colorantes citoplasmáticos: sol. Finamente dispersa..como ác. Pícrico, naranja G, naranja metilo, escarlata de Biebrich.
  • Colorantes conjuntivo: solución coloial…fucsina ácida, azul anilina y verde luz.

Otro factor es el pH utilizan colorantes: tienen mayor apetencia fibras colágenas medio fuerte ácido, pH óptimo torno 1.5 a 2.5, afinidad decrece mitad.

Coloración selectiva es importante fénomenos mordentaje previo ácidos fosfotúngstico y fosfomolíbdico. Ácidos bloquean residuos básicos tenga tejido dejando fuertemente catiónicos colágeno, unirán aniónicos colorante.

Coloración fibras colágeno varía según clase colorante utilizado, veces teñimos conjunto fibras colágenas y otras tipos ellas, cual deben tomar precauciones oportunas hora interpretar resultados y patrones tinción, procurando realizar técnicas condiciones estrictamente controladas.

Debido bajo pH realiza coloración diferencial, aconseja utilizar coloración nuclear lacas hmtx no sean decoloradas proceso tinción, impone uso hmtx.férricas.

  1. QUE ES UNA TECNICA DE IMPREGNACIÓN. TIPOS QUE CONOCES Y EN QUÉ CONSITE CADA UNO Y DIFERENCIAS SI LAS TIENE
  • Impregnación toda coloración especial utilizan sales metálicas como sales oro (cloruro oro), plata (nitrato plata), sales cromo….originar precipitados metálicos estructuras deseamos teñir.

Sales metálicas utilizadas son plata y ellas sal argéntica que usa nitrato plata, muy soluble en agua. Objetivo impregnación argéntica precipitar plata metálica partir sus sales para deposite tejidos. Consigue reduciendo sal plata, nitrato plata, obtener plata metálica es deposita.

Existen distintas formas impregnación argéntica:

  • Mecanismos físicos y físicos-químicos
  • Mecanismos histoquímicos
  • No histoquímica o métodos físicos o físicos-químicos.
  • IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA FISICOS O FÍSICOS-QUÍMICOS: la coloración estructuras produce mecanismo puro impregnación determinadas estructuras electronegativas, atraen mecanismo electrostático iones plata cargados positivamente. Tipo impregnación el tejido no interviene activamente mecanismo liberación plata metálica partir sal soluble. No todos tienen la misma afinidad por plata, intervienen distintos factores como carga eléctrica y textura células teñir.
  • IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA MECANISMOS HISTOQUÍMICOS: basa actuación componente tejido sobre nitrato plata cual ocurre precipitación plata metálica correspondientes iones. Tipo impregnación tejido interviene activamente depósito plata metálica través reacción química reducción. Son coloraciones discriminatorias permiten separar células en función descompongan o no nitrato plata o derivados.
  • IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA NO HITOQUÍMICA O MÉTODOS PREDOMNANTEMENTE FÍSICOS Y FÍSICOS-QUÍMICOS: caracteriza porque fijación hacerse formol, también líquido de Bouin. Impregnación dividirse: en impregnación 2 tiempos y impregnación 1 tiempo; métodos 2 tiempos hacen fases sucesivas, mientras métodos 1 tiempo realiza reducción severa.
  1. IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA 2 TIEMPOS: obtener plata metálica partir nitrato plata mediante reacciones sucesivas:
  • Tratar nitrato plata bases fuertes obtiene óxido plata precipita forma granulaciones parduscas.
  • Añadir amoníaco solución anterior, obtiene complejo iónico plata y amonio, plata amoniacal, soluble en agua y inestable.
  • Plata amoniacal reduce añadirle formol 10%, tiene capacidad captar oxígeno hasta precipitar plata dando producto reacción plata metálica, ácido fórmico y amoníaco. Plata metálica es deposita sobre tejido forma molecular estable.
  1. IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA 1 TIEMPO: parte nitrato plata, fundamenta reducción severa y directa sal plata a plata metálica través acción agente reductor potente, como hidroquinona. Técnica más lenta.
  1. EXPLICA PORQUE ES NECESARIO COLODIONADO, CUANDO QUEREMOS DEMOSTRAR GLUCÓGENO TEJIDO. COMO SE HACE Y EN QUE CONSISTE.
  • Técnica histoquímica. Primera parte, específica esta técnica, cargas positivas hidrato hierro coloidal unen cargas negativas presentes MPS ácidos, mediante mecanismo atracción electroestática, establece unión carácter físico- químico ambas. Segunda parte, consiste determinación histoquímica específica hierro férrico medio técnica azul Perls.
  1. FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO Y DIFERENCIAS ENTRE LOS DOS TIPOS QUE EXISTEN.
  • Tipos de microscopios electrónicos son:
  • Existen dos tipos microscopios electrónicos transmisión y barrido, ambos utilizan fuente energía haz electrones obtenemos un filamento tungsteno y dirige muestra.

Primero permite estudio estructura interna tejido, segundo estudio tridimensional superficie muestras. Tanto estudios microscopio electrónico transmisión necesitamos cortes tejidos muy finos, como permitir paso haz electrones mientras con microscópio electrónico barrido no lo permite.

Debemos conseguir haz electrones partir filamento tungsteno, consigue aplicándole filamento corriente eléctrica alto voltaje, forma filamento emite electrones desde corteza átomos forma flujo continuo. Filamento conectado transformador, eleva tensión corriente eléctrica. Para haz electrones discurra tubo necesario realizar vacio interior, asi no encontrarán ninguna partícula provoque desviación trayectoria.

Microscopio electrónico transmisión consigue gran parte aumento debido lleva incorporadas lentes electromagnéticas denominadas condensadora, amplificadora y proyectora u ocular, situadas largo tubo, concentran electrones punto, amplificando así acción.

Microscopio eléctrico barrido permite estudio tridimensional superficie muestras, utiliza haz electrones emitidos filamento tungsteno actúa como cátodo y dirigido hacia muestra través columna incluida microscopio. Desplaza sobre muestra realizando barrido superficie proyectado sincrónica y simultáneamente sobre pantalla observación. Dependiendo señal detectada, la información proporciona hace referencia distintos parámetros.