Metodología y experimentación

Bioquímica. Análisis bioquímico. Leche. Lactosa. Vitaminas A y C. Liposoluble. Hidrosoluble. Glúcidos. Biomoléculas. Glucosa. Sacarosa. Almidón. Titulación potenciométrica. Aminoácidos. Azúcares. Muestras. Bioinformática. Peso molecular. Proteína

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PRACTICA 1: ANALISIS BIOQUIMICO DE LA LECHE

Vamos a realizar un análisis cualitativo de la leche, para conocer los componentes que se encuentran en este líquido.

El contenido en proteínas es del 3.5%. Están constituídas por caseína, lactoalbúmina y lactoglobulina. La caseína es una proteína, que se encuentra combinada con calcio y en forma de suspensión coloidal(caseinógeno). Está formada por varias moléculas, caseinas alfa K, beta y gamma. La lactoalbúmina y la lactoglobulina son proteínas solubles, ricas en aminoácidos azufrados. La lactoalbúmina es un producto muy cercano a la albúmina y fácil de digerir. Se encuentra en forma de solución y precipita por calentamiento a 60º.

METODO

1.Separación del caseinógeno( precursor de la caseina)

Esta mezcla hay que pasarla por un embudo en el que se coloca un papel de filtro.

'Metodología y experimentación'

20 ml de leche + 65 ml de agua + 10 gotas de AcH

Se forma un precipitado blanco. Esto es debido a que su pH disminuye y se acerca a su punto isoeléctrico. Lo que queda en el papel de filtro es el caseinógeno. Con el filtrado realizaremos varias puebas.

2. Identificación del caseinógeno.

Lo que ha quedado en el papel de filtro se recoge con la varilla de vidrio y lo introducimos en un tubo de ensayo:

Caseinógeno + 2ml de agua + 1 ml de CO3NCl2

3. Triptófano.

El triptófano es un aminoácido que forma parte de la caseina. Al añadir ácido sulfúrico se forma una interfase. En la parte de arriba la sustancia parece tener un comportamiento viscoso. La parte de abajo es líquida.

4. Tirosina.

La tirosina posee en su cadena lateral un fenol, y este al reaccionar con el nítrico se observa una coloración roja. Es decir, en presencia de metales pesados dan un color rojo.

5. Lactoalbúmina y lactoglobulina.

Para este procedimento hay que utilizar el mechero para calentar la mezcla en el tubo de ensayo a partir del filtrado. Aparecera un coágulo del precipitado.

6. Lactosa.

La lactosa es el azúcar de la leche. Al filtrado vamos a añadirle solución de Fehñing A y B. El cobre gana un electrón volviendose más oxidante y la coloración pasa de azul a roja

Cu2+ Cu+

7. Identificación del fosfato tricálcico.

(PO4)2CO3 + NH4OH Ca(OH)-

Esta leche no tiene apenas calcio por lo que el precipitado gelatinoso no se observa.

CUESTIONES

  • ¿Qué factores hacen que precipiten la lactoalbúmina y la lactoglobulina? Indicar si su punto isoeléctrico será mayor o menor que el caseinógeno.

  • La lactoalbúmina precipita porque disminuye su pH y precipitan hasta llegar a su punto isoeléctrico.

    El punto isoeléctrico de la lactoalbúmina y de la lactoglobulina es mayor que el del caseinógeno, ya que en la prueba número 5, se debe calentar la disolución además de añadir azul tornasol. Para que el caseinógeno se neutralice solamente hay que añadirle agua.

  • ¿ A qué componente de la leche se debe su color blanco?

  • Al caseinógeno.

  • ¿ Qué diferencias de color se aprecian entre la prueba de Millón realizada al caseinógeno? ¿ A qué son debidas?

  • Se forma un coágulo flotante de tirosina a partir del caseinógeno.

    Se debe al Hg que posee el reactivo del Millón.

    PRACTICA 2: RECONOCIMIENTO DE LAS VITAMINAS A Y C

    VIT A

    Es una vitamina liposoluble. No convienen en exceso, ya que no son fluidos solubles en nuestro organismo y no se pueden eliminar vertiéndose por el cuerpo.

    Se detectan con cloroformo(disolvente).

    METODO

  • Vit A.

  • 1º) Limpiar el vidrio de reloj con etanol.

    2º) Una gota de aceite de hígado de bacalao en el centro (vit A).

    3º) 3-4 gotas de Cl3Sb.

    Se forma un color azulado. Esto es debido a que la vit a posee enlaces dobles conjugados, y en presencia de metales de transición (Sb), la coloración se vuelve fuerte.

    VIT C

    Es una vitamina hidrosoluble y su exceso en nuestro organismo no acarrea ningún problema. Tenemos tres fuentes con vitamina c en esta práctica:

    • Zumo de limón natural.

    • Zumo de naranja natural.

    • Redoxón (preparado farmaceútico).

  • En zumo de limón.

  • Le añadimos DPIP. Este reactivo nos da a conocer cuales sustancias o preparados serán oxidados o reducidos según la coloración. Así:

    • AZUL: Situación oxidada.

    • INCOLORO: En situación reducida.

    La vitamina C del limón pasa de un color a incoloro:

    VIT C VIT C

    (Red) (Ox)

    DP IP DPI P

    Para que perdiera el color azul le tuvimos que añadir 19 gotas de carbonato sódico y 45 gotas de DPIP.

  • Zumo de frutas comercial.

  • Realizamos el mismo procedimiento que el anterior y le tuvimos que añadir 10 gotas de CO3Na2 y 45 gotas de DPIP.

    4. Ácido ascórbico (redoxón).

    En este prueba no lo calentamos, y vemos que tenemos que añadir 10 gotas de carbonato y 11 de DPIP.

    5. Ácido ascórbico calentado.

    10 gotas de carbonato y 2 gotas de DPIP.

    6. Ácido ascórbico con sulfato de cobre

    SO4Cu Cu2+ . El cobre está reducido y oxidada a la vit c.

    7. Ácido ascórbico con peróxido de hidrógeno.

    Nuestro objetivo es hacer desaparecer la vit c. Al terminar este experimento, dejamos el tubo con peróxido de hidrógeno y se nos vuelve de nuevo incoloro. Esto es debido a los efectos que tiene el peróxido con el DPIP. Así:

    H2O2 H2O

    DPIP DPIP (reducido)

    H2O O2

    Le hemos añadido 10 gotas de carbonato y 2 gotas de DPIP.

    CUESTIONES

  • Contiene más vit C el limón.

  • Eliminar la vit C.

  • 0,5 g/l 11 gotas

  • x 45 gotas

    x = 2,045 g/l