Efecto de la temperatura y del ph sobre una enzima

Bioquímica. Reacción enzimática. Ph. Temperatura. Valores. Gráficos

  • Enviado por: Alvaro Pinto
  • Idioma: castellano
  • País: España España
  • 5 páginas
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Efecto

del

PH

y

Temperatura

sobre

una reacción enzimática

  • Objetivos:

    • Medir la Actividad enzimática de B-Glucosidasa con respecto a temperaturas diferentes y Ph diferentes.

    • Calcular la velocidad de reacción enzimática

    • Medir la temperatura optima para la enzima.

    • Medir el PH optimo de la enzima

    • Hacer curvas de calibrado

    • Realizar gráficos con ecuación de la recta, velocidad V/s Temperatura, velocidad V/s Ph.

Resultados:

Tabla de datos

Tubos

[PNF](nm)

Absorvancia (405nm)

1

0.00666

0.126

2

0.0133

0.23

4

0.02

0.3

5

0.0266

0.359

6

0.0333

0.390

7

0.04

0.430

M=8.81x; B=0.1014

A=8.81x + 0.1014

Para calcular la concentración de [PNF] :

Vinicial*Cinicial=Vfinal*Cfinal (V=velocidad , C=concentración)

Ejemplo de calculo [PNF]

[PNF]=(0.1*0.2)/3 =0.0066

*Para calcular el coef de extinción (mM)

A=* l*C

=8.81 (1/mM*cm)

Efectos de la temperatura

Tabla de datos

TUBO

T° (°C)

A(405nm)

Control

1

16

0.474

-0.009

2

40

0.482

-0.006

3

60

0.502

-0.007

4

100

0.401

0.000

Calculo de la velocidad enzimática:

V(UI/ml)= (A/*l )*(1/t)*(V/v)*Fd

A= Absorvancia del tubo menos la absorvancia del control

*l =Pendiente de la curva de calibrado (8.60)

t = Tiempo (5 Min)

V= volumen del ensayo (E+S)

V= volumen de enzima (0.1 ml)

Fd = factor dilucion del ensayo =volumen total/volumen de ensayo

Fd=3ml/0.9+0.1=3

Calculo de tubo 1 (ejemplo):

V(UI/ml )=(0.474-(-0.009))/5.23*(1/5min)*(1ml/0.1ml)*3 =0.554 (UI)

Tabla de datos

Tubo

T° (°C)

V(UI/ml)

1

16

0.554

2

40

0.560

3

60*

0.584 *

4

100

0.460

Efectos del PH sobre la reacción enzimática

Tabla de datos

TUBO

PH

A (405 nm)

Control

B

5.0

-

-

1

4.0

0.243

0.1

2

5.0

0.482

0.0

3

6.0

0.95

0.01

4

7.0

0.288

0.003

Cálculos de la velocidad de reacción enzimática:

Calculo de tubo 1 (ejemplo):

V(UI/ml )=(0.243-0.1)/5.23*(1/5min)*(0.1+0.9ml/0.1ml)*3 =0.164 (UI)

Tabla de datos

TUBO

PH

V (UI/Ml)

1

4.0

0.164

2

5.0

0.553

3

6.0

1.08

4

7.0

0.327

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