Determinación de proteínas

Bromatología. Química. Laboratorio. Experimentos. Método de Biuret. Materiales. Reactivos. Punto isoeléctrico. Preparación de la leche. Resultados. Conclusión

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C A S A A L T I E M P O

PRACTICA DE LABORATORIO 2

DETERMINACIÓN DE PROTEINAS

INTRODUCCIÓN

El termino proteína fue utilizado por primera vez por el químico alemán Gerardus Mulder, en 1838 , tomo este nombre del vocablo griego PROTERIOS , que significa primordial nivel primario .

Las proteínas son un grupo de biopolímeros constituidos de aminoácidos que exhiben una amplia gama de estructuras y funciones .

Las proteínas como un grupo de biomoleculas , desempeñan una gran variedad de funciones , algunas participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan moléculas pequeñas.

Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica ) son proteínas al igual que las enzimas (catalizadores biológicos) y algunas hormonas.

Las proteínas pueden llevar a cavo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de combinaciones en la composición y secuencia de aminoácidos.

Las proteínas también se clasifican según su composición , las que se forman solo de residuos de aminoácidos y no tienen otras biomoleculas son PROTEÍNAS SIMPLES; no odas las proteínas son solubles en agua , de hecho las proteínas insolubles son esenciales para dar soporte y mantener la integridad estructural de las células y organismos.

DESARROLLO

METODO DE BIURET

Material por equipo

  • 1 proveta de 50ml.

  • 2 gradillas

  • 2 pipetas de 10ml

  • 3 pipetas de 5ml

  • 1 pipeta de1ml

  • tuvos de15x100-12 piezas

  • 1 vaso de presipitados de 100 ml

  • 12 tubos de 16x150

  • 1 balanza granataria

  • papel parafilm para 10 tubos

  • papel embudo y un filtro

REACTIVOS POR EQUIPO

  • Agua destilada

  • Solucion de acido acetico 0.1 N

  • Solucion de Acetato de sodio 0.1 N

  • Solucion de caseina (contenido 4 mg/ml)

  • Reactivo de Biyret 50ml

MATERIAL TRAIDO POR EQUIPO:

  • 6 gramos aprox. De leche en polvo descremada

  • 1 plumon indeleble

  • masking tape

  • javon y franela para limpiar

DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELECTRICO

En la preparación de tubos con solucion amortiguadora de acetatos en la grailla se colocaron 6 tubos de 15x100 rotulados con numeros consecutivos , se adiciono a caadad tubo las soluciones de acido acetico y acetato de sodio con el siguiente orden :

TUBO SOLUCION DE ACIDO SOLUCION ACETATO DE

ACETICO 10.1 N SODIO 0.1N

1 5ml -

2 4 ml 1 ml

3 3ml 2ml

4 2ml 3ml

5 1ml 4ml

6 - 5ml

el volumen de cada tubo deberá de ser de 5 ml 1:30

PREPARACIÓN DE LA LECHE

En un vaso de precipitados de 100 ml se disolvieron 6 gr de leche en polvo descremada con 50 ml de agua destilada incorporándola poco a poco para que no se formaran grumos .

En un tuvo de ensaye de 16x150 mm se midio 2ml de leche reidratada y añadimos 8ml de agua destilada agitando cuidadosamente por inversión. 1:5

PUNTO ISOELECTRICO

Añadimos 1 ml de leche diluida (1:5) a cada tubo de la solución amortiguadora , después mezclamos cuidadosamente todos los tubos y dejamos reposar por 10 minutos .

En el tubo 1 donde observamos los grumos de leche suspendidos en la solución se solubilizaron las proteínas de leche

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

Después se separo el sobrante y se transfirió a los tubos limpios de 15x100 rotulados con el numero de tubo que le correspondia.

  • Tubo 1: CLARO

  • Tubo 2 : CLARO CON SOBRENADANTE

  • Tubo 3: CLARO CON SOBRENADANTE

  • Tubo 4: CLARO CON SOBRENADANTE

  • Tubo 5: TURBIO

  • Tubo 6: TURBIO

DETERMINACIÓN DE PROTEINAS CON EL METODO DE BIURET

Se colocaron en una gradilla 11 tubos de 16x150 mm, rotulando a un tubo con el numero cero el cual llevo los reactivos para calibrar el espectrofotometro , los siguientes 4 tubos los rotulamos de I al IV , y los restante los rotulamos de 1 al 6.

Se añadio a cada tubo de reactivos para determinar las proteinas en la curva de calibración (I IV) y los sobrenadantes en los tubos del 1 al 6 .

Mezclamos cuidadosamente cadad reactivo y los dejamos en reposo por 30minutos para favorecer el color .

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6

AZUL AZUL Y MORADO AZUL AZUL AZUL AZUL

TUBO I TUBO II TUBO III TUBO IV TUBO V TUBO VI

AZUL CLARO INTERMEDIO MORADO MORADO MORADO MORADO

RESULTADOS

En la siguente tabla estan los resultados que obtuvimos de absorvancia o densidad optica.

TUBO

I

II

III

IV

V

1

2

3

4

5

6

D.O

0.32

0.60

0.093

0.127

0.152

0.17

0.020

0.008

0.008

0.19

0.23

MG. DE PROTEINA

0.8

1.6

2.4

3.2

4

0

0.12

0.037

0.076

0.12

  • Calcula el contenido proteico de los tubos I al IV deacuerdo al volumen empleado de la solucion en estandar de caseina y colocalos en el eje x.

  • Coloca los valores O.D obtenidos para cada uno de estos tubos en el eje y y traza la curva correspondiente.

  • Interpola los valores de O.D de los tubos 1-6 , calcula la cantdad de proteina precente en cada sobre nadante

TABLA DE RESULTADOS.

PROTEINA

Mg/ ml

Mg/ 100 ml

Sobrenadante1

5.1

510

Sobrenadante2

0.6

60

Sobrenadante3

0.24

24

Sobrenadante4

0.24

24

Sobrenadante5

0.57

57

Sobrenadante6

6.9

690

  • haciendo uso de la ecuación de HEENDERSON HASELBACH calcula el pH del tubo de donde observaste la mayor precipitación de caseína.

0.4 mg proteina x 5x6x2 =24 mg proteina/ml

6g 1000 ml =120 g leche

30 ml 1 L L

2 ml + 8 ag

1 ml +5 = 6 ml 0.5+0.5 = 1 ml

24 g proteina

L = 0.2 g proteina

120 g leche g de leche

L

  • Describa brevemente la ley de lambert y beer y cuales son sus limitaciones.

BIBLIOGRAFÍA

  • Conceptos de bioquímica de Rodney Boyer

CONCLUSIÓN

Con el metodo de Biuret se le quitaron a la leche muchas de sus propiedades y al meter os resultados al centrifugado la leche salio muy clarita cambiando su aspecto natural , cumpliéndose el objetivo pudimos sacar el punto isoelectrico exacto