Practica 4

PRODUCCION DE ACIDO PURIVICO DURANTE LA FERMENTACION DE LA GLUCOSA POR LA LEVADURA Y SU IDENTIFICACION

INTRODUCCION

La glucólisis es el proceso por el cual la glucosa se degrada a Etanol y CO2, y/ó a ácido láctico dependiendo del organismo que lo efectúe, como siendo en el primer caso las levaduras las responsables.

Ambas rutas de fermentación son similares hasta la formación de piruvato, manteniendo idénticas las etapas de conservación de energía que conducen a la formación de ATP.

La glucólisis no solo es la ruta principal para el metabolismo de la glucosa que conduce a la producción de Acetil-Co-A y a su oxidación en el ciclo del ácido cítrico, sino que también proporciona una vía importante para metabolizar fructosa y galactosa derivada de los alimentos. La característica de la glucólisis de proporcionar ATP en ausencia de oxígeno es de significado crítico biomédico, porque permite al músculo esquelético hacer un trabajo sumamente eficiente aún cuando la oxidación aeróbica se vuelva insuficiente, a la vez que los tejidos con capacidad glucolítica pueden sobrevivir a episodios de anoxia. Inversamente el músculo cardíaco, que está adaptado al trabajo aeróbico, tiene una capacidad glucolítica relativamente deficiente y supervivencia escasa bajo condiciones de isquemia. Hay un número pequeño de enfermedades en las que las enzimas del sistema glucolítico como por ejemplo la piruvatocinasa muestran actividad deficiente; estas anomalías se manifiestan principalmente como anemias hemolíticas. En las células cancerosas que proliferan con rapidez, la glucólisis procede a una velocidad mucho mayor que la requerida por el ciclo del ácido cítrico, por tanto, se produce más piruvato que el puede ser metabolizado. El resultado es una producción excesiva del lactato, que favorece un entorno local relativamente ácido en el tumor, situación que puede tener implicaciones con ciertos tipos de terapéutica contra el cáncer. También se produce acidosis láctica por deficiencia de piruvato deshidrogenasa.

OBJETIVOS

MATERIAL

• Tubos de ensaye de 13 x 100

• Tubos de centrifuga

• Tripie, rejilla, anillo, mechero.

• Baño maría.

• Pipetas de 5 ml. graduadas.

• Centrifuga.

• Vasos de precipitados de 250 y 600 ml.

• Pinzas para tubos de ensaye.

• Solución de glucosa a diversas concentraciones 0.5, 1.0, 2.0%

• Suspensión de levadura al 5 % en Na2HPO4 y KH2PO4 (18 hrs de fermentación antes de su utilización).

• Ácido tricloroacético al 10%

• Nitroprusiato de sodio.

• 2,4 dinitrofenil-hidracina.

• Hidróxido de amonio concentrado.

• Hidróxido de sodio 0.1N

• Sulfato de amonio sólido.

Nota: un día antes de la práctica llevar su levadura para fermentarla

METODOS Y TECNICAS

Formación de Piruvato:

Identificación de Piruvato:

En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y hervirlo.

Adicionarle 0.5 gr. de sulfato de amonio sólido y agitar.

Agregar dos gotas del reactivo y mezclar vigorosamente y dejar deslizar por las paredes del tubo unas gotas de hidróxido de amonio concentrado, hasta la formación de dos capas. La formación de un anillo verde o azul en la interfase indica afirmativo para la prueba. Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series.

En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y adicionar 1 ml. del reactivo, agitar con fuerza y pasar a otro tubo la mitad de la mezcla formada, y adicionar 1 ml. de NaOH 0.1N. La aparición de un color rojo indica prueba afirmativa.

Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Observar la coloración e intensidad de la misma en cada caso.

CUESTIONARIO