Guia Nº 2
Determinación de Biomoléculas II : LÍPIDOS , proteínas y ACTIVIDAD Enzimática.
i. Determinación de Características Lipídicas:
Los lípidos son un grupo general de sustancia orgánicas insolubles en solventes polares como el agua, pero que se disuelven fácilmente en solventes orgánicos no polares, tales como el cloroformo, el éter y el benceno. Típicamente, son moléculas de almacenamiento de energía, usualmente en forma de grasa o aceite, y además cumplen funciones estructurales, como en el caso de los fosfolípidos, glucolípidos y ceras. Algunos lípidos, sin embargo, desempeñan papeles principales como mensajeros químicos, tanto intra como intercelular.
Las propiedades físicas de una grasa, como por ejemplo su punto de fusión, están determinadas por las longitudes de sus cadenas de ácidos grasos y dependen también de si las cadenas son saturadas o no saturadas. En los grasos insaturados, los dobles enlaces provocan que las cadenas se doblen; esto tiende a separar las moléculas, produciendo un líquido como el aceite de oliva o de girasol.
ii. Determinación de Proteínas y Actividad Enzimática
Las proteínas son polímeros formados por monómeros (unidades básicas de construcción) de aminoácidos. La estructura de las proteínas se puede describir a diferentes niveles de organización, cada uno representado por una estructura y cada uno dependiente de diferentes tipos de interacciones. Se describen 4 niveles: estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. Dichos niveles pueden verse alterados por factores como aumento de temperatura y variaciones de pH, induciendo el proceso de denaturación protéica (pérdida de estructuras superiores a estructuras simples y por ende pérdida de la funcionalidad de la proteína).
Las Proteínas, son macromoléculas que ejecutan prácticamente todas las actividades de la célula.
Como enzimas las proteínas aceleran la velocidad de las reacciones metabólicas; como fibras estructurales, suministran apoyo mecánico a nivel celular y extracelular; también presentan funciones como hormonas, factores de crecimiento y activadores de genes, etc.
Objetivos
Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lípidos, algunas de las cuales pueden servirnos para su identificación
Reconocimiento de lípidos en solución
Reconocer macromoléculas orgánicas presentes en las células
Reconocer la presencia de proteínas en diferentes soluciones
Analizar y observar el proceso de denaturación de las proteínas
Analizar la actividad enzimática frente a diferentes factores
ACTIVIDADES PARA DESARROLLAR EN EL PRÁCTICO
i. Reconocimiento de Lípidos
Disponer en una gradilla dos tubos de ensayo, colocando en ambos 2 ml de aceite de comer
Añadir a uno, 4 o 5 gotas de solución alcohólica de Sudán III. Al otro tubo añadir 4-5 gotas de tinta roja. Agitar ambos tubos y dejar reposar
Registre sus observaciones
II. Solubilidad de Lípidos
Tomar 4 tubos de ensayo y poner en cada uno de ellos
TUBO A 3 ml de agua , TUBO B 3 ml de éter, TUBO C 3ml de acetona y TUBOD 3ml (1,5 ml acetona y 1,5 ml éter)
Añadir a cada tubo 1ml de aceite de oliva y agitar fuertemente. Observar la formación de gotitas o micelas y dejar en reposo.
Registre sus anotaciones
Reconocimiento de Proteínas
3.1 Test de Biuret
Coloque en un tubo de ensayo 3 ml de albúmina y en otro 3 ml de almidón.
Agregue igual volumen de reactivo de Biuret (la coloración púrpura indica reacción positiva).
3.2 Denaturación de Proteínas
En un tubo de ensayo coloque 2 ml. de albúmina de huevo y sométalo a la llama del mechero.
A 2 ml de albúmina agregue, escurriendo por las paredes del tubo, 2 ml de ácido nítrico.
En otro tubo, coloque 2 ml de albúmina y deje escurrir 2 ml de hidróxido de sodio 20%.
Características de las Enzimas
Coloque 25 ml. de saliva en un vaso precipitado de 250 ml. y diluya hasta 50 ml. con agua destilada y agite. De esta solución stock reparta 15 ml. a cada grupo para utilizarla en los experimentos siguientes:
Rotule tres tubos de ensayo y coloque en cada uno de ellos 2 ml. de saliva. Al primer tubo póngale hielo
Al segundo, en un baño a 37°C
Al tercero, a la llama del mechero
Agregue 0,5 ml. de almidón a cada uno, espere 15 minutos y luego reconozca la presencia de almidón en los tres tubos.
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saturación enzimática.
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Km.
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Velocidad máxima.
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Biomoléculas
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